Анти вич анализ крови

Тест на ВИЧ позволяет выяснить, присутствует ли вирус иммунодефицита человека, его антигены или антитела к белкам ВИЧ в крови, моче или слюне [1] . Анализом на вирусную нагрузку называется определение количества копий РНК вируса иммунодефицита человека в миллилитре плазмы крови, которое позволяет судить о стадии заболевания и эффективности антиретровирусной терапии [2] [3] .

Содержание

Принципы [ править | править код ]

Разработаны различные принципы тестирования, из них два используются наиболее часто: обнаружение антител и выявление белков, характерных для вируса. Результат теста принято называть положительным (вирус обнаружен), отрицательным (вируса нет) или сомнительным (маркеры вируса есть, но не все, результат не может считаться положительным) [4] [5] .

Антитела к ВИЧ [ править | править код ]

По некоторым данным, у 99 % инфицированных антитела обнаруживаются в течение первых 12 недель (6—12 недели) после первичного контакта с вирусом [6] , по другим данным: у 90—95 % антитела к ВИЧ появляются в течение 3-х месяцев после заражения, у 5—9 % — через 6 месяцев, 0,5—1 % — в более поздние сроки [7] ).

Период с ложноотрицательным результатом антител называется «периодом окна». Уже в это время инфицированный человек может быть источником инфекции [8] .

Первыми выявляемыми антителами являются «gag» (англ. group antigen ) белки ВИЧ — р24 и р17, а также прекурсор р55. Образование антител анти-р24 сочетается со снижением уровней свободного антигена р24, выявляемого в крови до появления антител [9] [10] . Вслед за антителами анти-р24 появляются антитела против белков «Env» (англ. Envelope ) — gp160, gp120, p88, gp41 и гена «pol» (англ. Polymerase ) — p31, p51, p66. Могут определяться также и антитела против генов «vpr», «vpu», «vif», «rev», «tat», «nef» [11] [12] .

Наиболее изученными антителами являются антитела, направленные против белков «Env» — gp120, gp41. Они разделяются на два класса: тип-специфичные и групп-специфичные. Другая группа антител анти-gp120, участвующая в антител-зависимом цитотоксическом действии (англ. ADCC ) и уничтожении инфицированных ВИЧ-клеток CD4+, может уничтожать и неинфицированные клетки, рецепторы которых связаны свободным gp120, циркулирующим в крови — эффект, названный «Innocent bystanders» («Bystander killing») [13] [14] .

Тест-системы, определяющие иммунный ответ [ править | править код ]

Предварительным тестом на ВИЧ является ИФА, определяющий наличие в крови антител, которые вырабатывает организм для борьбы с вирусом. Этот тест обладает высокой надёжностью (около 90 %) и селективностью, хорошо отработанная технология сделала этот тест недорогим (себестоимость около 1 долл. США). Для анализа берётся небольшое количество крови из вены [15] .

Существуют также экспресс-тесты для анализа слюны и мочи, которые позволяют проводить тестирование без укола [16] . В России утверждён единственный тест на слюну (околодесенная жидкость) производства США. На родине производителя он прошёл испытания и получил сертификат FDA. В России его испытаниями занимался ГИСК Им. Л. А. Тарасевича в 2009 году [17] .

Выработка антител начинается в организме примерно в течение первого месяца после попадания вируса, затем их количество постепенно растёт. Спустя еще два-два с половиной месяца вырабатывается достаточная концентрация антител для надёжного определения. Поэтому во многих странах (в том числе и в России) перед тестированием пациента предупреждают, что достоверный результат определяется спустя 3—6 месяцев после контакта с вирусом (ок. 90—95 % людей спустя 3—4 месяца, 5—9 % людей спустя 6 месяцев, 0,5—1 % людей гораздо дольше).

Если ИФА показал положительный результат, его перепроверяют с помощью более точного теста иммуноблот. Этот тест имеет очень высокую чувствительность и достоверность (99,9 %), но иногда выдаёт ложноположительные срабатывания. Диагноз «ВИЧ-инфекция» ставится лишь при наличии двух положительных результатов одновременно: ИФА и Вестерн-блот (иммуноблоттинг) [15] .

Тест-системы, определяющие ДНК вируса [ править | править код ]

Самым распространённым из этой группы является тест под названием ПЦР (полимеразная цепная реакция). Обладает меньшей точностью (ок. 85 %), чем ИФА, однако может быть использован уже спустя 10 дней после возможной передачи вируса. Применяется в случаях, когда желателен ранний предварительный результат (до истечения 3 месяцев) или иммунный ответ не может служить показателем: у новорождённых, у пациентов, проходивших иммуносупрессорную терапию (отключение иммунного ответа). По результатам ПЦР диагноз не ставится [18] .

Новый тест TZA [ править | править код ]

Сотрудники Питтсбургского университета (University of Pittsburgh) разработали новый высокочувствительный тест для обнаружения скрытых вирусов [19] . Ведущий автор исследования Фалгуни Гупта (Phalguni Gupta) сообщил, что этот тест будет эффективнее и дешевле существующих методов диагностики ВИЧ. Тест назвали TZA – он делается быстрее и крови для него требуется меньше. Принцип действия TZA – поиск гена, который активируется только при репликации вируса. По результатам теста было установлено, что у пациентов, у которых ВИЧ никак себя не проявлял в результате антиретровирусной терапии, резервуары вируса значительно больше – примерно в 70 раз. Однако новый тест не заменит предыдущий полностью, поскольку у Q-VOA и TZA разный механизм действия, и в зависимости от конкретного случая нужно применять подходящий тест [20] .

Достоверность результатов анализа [ править | править код ]

Сомнительным (или неопределённым) результат выявляется в случае, если результат невозможно трактовать как однозначное наличие вируса (например, присутствия в сыворотке крови антител, перекрёстно реагирующих с белками ВИЧ). В таком случае часто рекомендуют пересдать тест через несколько недель или применить более специфические тест-системы.

Ложноположительным результатом называется ситуация, в которой вируса нет, а тест показал положительный результат. Это возможно для теста по методу ИФА, последующая проверка с помощью другой системы подтверждает отсутствие вируса [21] .

Ложноотрицательный результат — отрицательный показатель теста при том, что вирус присутствует. Такая ситуация может сложиться, если анализ проводится слишком рано, до истечения 3 месяцев (недостаточно антител в крови для срабатывания) [21] . Отрицательный результат даёт и анализ ПЦР во время проведения терапии против ВИЧ [22] , когда концентрация вирусов в крови становится ничтожной, ниже порога срабатывания.

СПИД [ править | править код ]

При помощи анализа наличия антигенов вируса или антител к белкам вируса невозможно установить стадию заболевания, определить, находится пациент в терминальной стадии (СПИД) или болезнь находится на более ранней стадии. Тест на ВИЧ лишь показывает наличие вируса или антител к вирусу в организме. Стадия приобретённого иммуного дефицита диагностируется при наличии как минимум двух ассоциированных оппортунистических заболеваний [23] .

Социальные аспекты и юридические нормы [ править | править код ]

Тестирование на ВИЧ очень важно с точки зрения сохранения здоровья человека [24] . Результаты могут повлиять на планирование жизни и карьеры, отношение к собственному организму, сексуальные практики и точку зрения на употребление вредных или опасных субстанций. Вместе с тем результат может стать известен окружающим, а значит, служить причиной для дискриминации [25] : увольнения с работы, развода с супругом, потери близкого человека или друзей, отказа в предоставлении медицинской помощи или других услуг. Часто получение положительного результата теста приводит к сильному стрессу у самого человека. Поэтому решение о тестировании должно приниматься осознанно, без давления и на полностью добровольной основе.

В настоящее время тест доступен в большинстве российских городов. Как правило, тест по желанию пациента можно сделать анонимно и бесплатно. Документы требуются, если пациенту нужна справка с результатом на его имя. Забор крови делают в районных кожно-венерологических диспансерах (КВД), городских СПИД-центрах (организованных во всех городах уровня районного и областного центра) и многочисленных коммерческих лабораториях [26] .

Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан от 22 июля 1993 года № 5487-1 устанавливают [27] , что для любого медицинского вмешательства необходимо информированное добровольное согласие пациента. Это, в частности, означает, что забор крови не может быть на законных основаниях произведён принудительно. Исключение сделано для пациентов, чьё состояние здоровья не позволяет им выразить свою волю (в этом случае решение принимает медицинский консилиум), и для подростков младше 15 лет (решение принимают законные представители).

Принудительное тестирование каких бы то ни было групп населения бесперспективно с точки зрения сдерживания эпидемии [ источник не указан 260 дней ] и противоречит соблюдению прав человека. Проведение теста без согласия человека является незаконным в России. Существуют также 4 ситуации, в которых предоставление результатов тестирования на ВИЧ является обязательным (но не насильственным — каждый может просто отказаться от участия [28] :

1. Донорство крови, других биологических жидкостей и органов.
2. При устройстве на работу медицинского работника или другого специалиста в учреждение, которое непосредственно обрабатывает или принимает материалы, заведомо содержащие ВИЧ.
3. Для иностранных граждан — получение виз для проживания на территории России сроком более 3 месяцев.
4. Тестирование лиц, находящихся в местах лишения свободы в случае наличия клинических показаний (и в этом случае обследование может быть проведено только с согласия пациента).

После попадания в организм вирус иммунодефицита человека внедряется в иммунную систему (CD4 Т-лимфоциты), где размножается и встраивает собственную генетическую информацию в ДНК клетки-хозяина. Естественный процесс деления последней приводит к удвоению и вирусных генов, что, спустя многократный цикл, приводит к массовому их распределению.

Чтобы предупредить организм о возникшей опасности пораженная клетка выставляет на своей поверхности частицы патогенного микроорганизма – антигены. Иммунитет идентифицирует их и вырабатывает строго специфические белковые молекулы – антитела, которые предназначены для уничтожения пораженных структур с последующей их утилизацией.

Однако учитывая тот факт, что HIV изначально поражает иммунную систему, ее защитные механизмы оказываются неполноценны, поэтому вирус не может быть уничтожен, он еще больше распространяется, инфицируя новые клетки.

Одним из наиболее простых, доступных, ранних и быстрых анализов на ВИЧ-патологию является определение содержания в крови тех самых антител, сокращенное название которых АТ к ВИЧ 1, 2 (к разным типам).

Показания к поиску anti-HIV:

Желание пациента (в том числе и на анонимной основе);

Перед проведением инвазивных вмешательств или больших хирургических операций;

Симптомы поражения иммунитета (температура тела до 35,5*С, слабость, потливость, озноб, хронические инфекции, не поддающиеся лечению, увеличение лимфоузлов, частый герпес, постоянные кишечные расстройства);

Половые контакты с партнером, сомнительным в отношении HIV;

Употребление инъекционных наркотиков;

Контакт с биологическими жидкостями от заряженного пациента (у медицинского персонала, татуировщиков);

Следует знать, что ВИЧ-антитела не сразу появляются после инфицирования. Это происходит в среднем через 25 дней, затягиваясь иногда до трех месяцев – так называемый инкубационный период. Следовательно, после эпизода высокой вероятности заражения анализ на антитела необходимо сдавать повторно через 3 и 6 месяцев.

При положительном ответе (anti-HIV-антитела выявлены) пробу повторяют аналогичным методом, но уже с реактивами из другой серии (для исключения ложно-положительных результатов). Если АТ к ВИЧ выявлены и повторно, то затем кровь проверяют по другой методике, где определяются вирусные антигены. Это более достоверное исследование, по его заключению составляется однозначный вывод о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции.

Несмотря на то, что на сегодняшний день болезнь считается неизлечимой, своевременная её диагностика позволяет вовремя начать интенсивные курсы противовирусной терапии. Благодаря такому лечению сохраняется полноценное качество жизни, высокая социальная адаптация и на максимально длительный срок оттягивается развитие конечной стадии заболевания – СПИДа.

Одним из наиболее достоверных исследований на ВИЧ является ИФА (иммуноферментный анализ). Чтобы выявить наличие вируса иммунодефицита в крови, проводится тестирование на антитела. Стоит ли волноваться, если их не обнаружили? Что означает положительный результат ИФА?

О чем говорят антитела к ВИЧ в крови

Если в организм человека попал болезнетворный вирус, иммунная система начинает вырабатывать антитела к ВИЧ. Когда в исследуемой пробе крови обнаружены такие белковые соединения, это является тревожным сигналом. Велика вероятность, что человек заражен опасным вирусом. Обнаруженный антиген ВИЧ р24 говорит о том, что недавно произошло инфицирование вирусом иммунодефицита. Антиген – органическое вещество. Количество его в крови уменьшается по мере продуцирования организмом антител. Количество антител на единицу крови позволяет прогнозировать развитие болезни.

Еще одна важная характеристика – вирусная нагрузка (концентрация вирусных клеток в 1 мл плазмы крови). Чем больше величина данного показателя, тем сильнее угнетена иммунная система. Она не в силах препятствовать размножению вируса.

Через какое время появляются антитела к ВИЧ

Иммуноферментный анализ на ВИЧ проводят через 3 – 4 недели после возможного заражения. Делать это раньше бессмысленно, ведь антитела еще не успели сформироваться, либо их слишком мало. Если заражение произошло, а антител ВИЧ в крови не обнаружено, то подобный тест называют ложноотрицательным. Чтобы поставить окончательный диагноз, первичной положительной реакции ВИЧ-тестов недостаточно. Гарантом достоверности исследований является перепроверка. Новую диагностику выполняют спустя 3 месяца и через полгода. Если все результаты положительны, назначают дополнительные тестирования.

Указанные сроки – среднестатистические. В каждом отдельном случае сроки отличаются. Если порция зараженного биоматериала, попавшего во внутренние среды организма, была велика, защитные белки – антитела – могут сформироваться уже через неделю. Такое возможно при переливании инфицированной крови. В 0,5% случаев обнаружить ВИЧ удается только через год. Подобное бывает, если количество вирусных клеток очень мало.

Сроки, когда антитела появляются в организме зараженного человека:

• в 90 – 95% случаев – через 3 месяца после предполагаемого заражения;
• в 5 – 9% случаев– через 6 мес;
• в 0,5 – 1% случаев – в более поздние сроки.

Нормы показателей на наличие антител

Антитела, или иммуноглобулины, образуются при попадании в организм чужеродных вирусов и бактерий, а также любых вредоносных органических соединений. Для каждой вирусной клетки существует свой антагонист. Образуются уникальные пары: инородная клетка + иммуноглобулин. Выявив антитела, присутствующие в организме, медики получают информацию о вирусах, которые спровоцировали их возникновение. Иммуноглобулины делят на 5 групп:

1. IgA – отвечают за иммунный отпор при простудах, кожных воспалениях, общей интоксикации;
2. IgE – призваны бороться с паразитами;
3. IgM – стражи организма. Они «атакуют» вирусные клетки, как только они проникают в кровь;
4. IgD – пока направление их деятельности неизвестно. Таких иммуноглобулинов не более 1%;
5. IgG – обеспечивает сопротивление при длительном течении болезни, отвечает за защиту плода в утробе матери и является основным барьером от вирусов у новорожденных. Рост уровня IgG в крови может свидетельствовать о развитии ВИЧ.

Нормальные показатели IgG (гигамоль на литр)

Дети от 7,4 до 13,6 г/л

Взрослые от 7,8 до 18,5 г/л

Чтобы выявить антитела к ВИЧ, проводят количественный анализ. Отрицательный результат – норма для здорового человека. Положительный тест указывает на проникновение в организм вирусных частиц, против которых синтезируются защитные иммуноглобулины.

Если в графе «антитела» стоит «+», подводить итог еще рано, назначают дополнительные исследования. Не всегда причиной положительной реакции бывает заражение ВИЧ. Часто проявляются другие причины отклонения от нормы. Причины ложноположительных реакций:

• в первые 18 месяцев жизни в крови ребенка содержатся иммуноглобулины, полученные им от матери во время беременности;
• течение в организме аутоиммунных процессов;
• наличие ревматоидного фактора;
• прием лекарственных препаратов.

Количественный анализ помогает определить стадию болезни. Если число иммуноглобулинов незначительно, заболевание только начинает развиваться. Прогноз в подобном случае благоприятный. Высокая концентрация защитных белков может означать, что ВИЧ достиг завершающей стадии – СПИДа.

Выделяют ВИЧ 1 и 2 типов. Каждый из них вызывает формирование определенных антител. Определить тип антител помогает качественный анализ. В бланке такого тестирования указаны цифры 1 и 2, и данные заполнены напротив каждой из них.

Как выявляют антитела к ВИЧ

Из порции венозной крови выделяют сыворотку. Ее наносят на твердую основу и соединяют с вирусными клетками. Затем поверхность обрабатывают специальными ферментами. В крови, где изначально присутствовали вирусы иммунодефицита, после промывки вырабатываются антитела.

Человек, которому предстоит сдать кровь на антитела, за 2 дня до анализа должен отказаться от жирной и острой пищи, не пить алкогольных напитков. За 2 недели рекомендуется прекратить прием противовирусных лекарств. Любые препараты следует употреблять только при крайней необходимости. Накануне теста рекомендуется соблюдать психологический и физический покой. Анализ проводят натощак в утренние часы. Исследования на наличие антител признаны наиболее достоверными в диагностике ВИЧ-инфекции. Погрешность составляет не более 2%.

Показания к проведению ИФА, включая клинические признаки ВИЧ:

• постоянные рецидивы инфекционных заболеваний;
• длительная лихорадка;
• высокая вероятность заражения (незащищенные половые контакты или переливание крови от ВИЧ-позитивного человека);
• госпитализация в стационар;
• сдача донорской крови;
• планирование беременности и ее течение;
• травма иглой или другим острым предметом, инфицированным биологическим материалом;
• перед хирургическим вмешательством.

Признаки ВИЧ могут появиться не сразу. В некоторых случаях болезнь не дает о себе знать очень долго (до 10 лет). Данный факт препятствует своевременной диагностике и лечению. Чтобы вовремя распознать вирус иммунодефицита человека, следует сдать анализы при малейшем подозрении. В случае подтверждения диагноза выявляются все половые партнеры инфицированных. Им следует сдать анализы и определить свой ВИЧ-статус. Медицинский персонал, работающий с больными ВИЧ, должен проходить плановые проверки.