Лабораторная диагностика лямблиоза

Лямблиоз — паразитарное заболевание, относящееся к группе кишечных инфекций. Возбудитель, проникая в организм человека, вызывает поражение органов пищеварения (кишечника, двенадцатиперстной кишки, печени). Болезнь распространена как среди взрослых, так и в детских коллективах.

По сведениям статистики, лямблиоз обнаруживают при обследовании у 3–15% взрослого населения и у 30–40% организованных детей, включая школьников. Показатель выше в слаборазвитых странах. Своевременная диагностика лямблиоза позволяется вовремя провести противопаразитарное лечение и избавить людей от развития хронической патологии желудочно-кишечного тракта.

Какие свойства возбудителя необходимо учитывать в способах диагностики?

Первым описал причину заболевания русский доктор Д.Ф. Лямбль в 1859 г., с его именем и связано название паразита и заболевания. В европейских странах эта роль отдается французу А.Жиарду, поэтому можно встретить еще наименование болезни, как «жиардиаз».

Лямблия является простейшим одноклеточным жгутиковым микроорганизмом. Паразитирует в основном в начальных отделах тонкого кишечника человека (двенадцатиперстной и тощей кишке). Может существовать в двух формах: вегетативной (трофозоит) и спорах (цисты). Под микроскопом их несложно распознать по характерной грушевидной форме, присоскам и четырем парам жгутиков.

Лямблии питаются через оболочку путем всасывания из кишечника нужных веществ, отнимая их у организма зараженного человека. Размножение осуществляется быстро делением, удвоение численности происходит каждые 10–12 часов. Цисты лямблий снабжены двухконтурной капсулой, овальные по форме.

Находятся только в толстой кишке, выделяются с калом больного во внешнюю среду, где длительно сохраняют жизнеспособность. Эта особенность позволяет сравнительно просто организовать диагностику лямблиоза по исследованию испражнений. Человек заражается через немытые руки, овощи с грядки, воду, загрязненные пищевые продукты, в быту фекально-оральным путем. Возможными переносчиками цист служат домашние животные, мухи, тараканы.

По какой симптоматике можно заподозрить лямблиоз?

Чтобы обнаружить лямблиоз, необходимо знать симптомы заболевания и учитывать возможные формы течения. Предполагаемый диагноз возникает у врача при анализе жалоб пациента, осмотре. Заболевание имеет острую и хроническую форму. Важной особенностью считается практически бессимптомное носительство у ¼ пациентов, слабовыраженные проявления — в половине случаев (субклиническое течение).

Только у 25% зараженных выявляются типичные симптомы лямблиоза (манифестное течение). В зависимости от превалирования признаков поражения органов и систем принято различать 4 формы болезни:

• кишечную — проявляется расстройством функционирования тонкого и толстого кишечника по типу дуоденита, энтерита и гастроэнтерита, вызывает дуодено-гастральный рефлюкс;
• билиарно-панкреатическую — симптомы лямблиоза у взрослых и детей похожи на клинику воспаления и дискинезии желчного пузыря, выводящих путей, панкреатита;
• внекишечную — отличается токсическими и аллергическими признаками, сопровождается неспецифичным астено-невротическим синдромом, вегетососудистой дистонией;
• смешанную — по симптомам сложно в диагнозе определить вариант поражения, для подтверждения необходим анализ на лямблиоз.

Симптомы лямблиоза обычно появляются спустя 1–3 недели после заражения. Такова продолжительность инкубации цист до превращения в вегетативную форму. В острой фазе воспаления пациенты жалуются:

• на неинтенсивные боли вокруг пупка, в подреберье справа;
• снижение аппетита;
• тошноту;
• тяжесть в зоне эпигастрия;
• отрыжку;
• усиленное газообразование в животе;
• склонность к диарее (стул до 5 раз за сутки, водянистый, пенистый, затем приобретает жирный блеск), понос может чередоваться с запором.

Если лямблиоз переходит в хроническую стадию, то пациенты заметно худеют, становятся раздражительными, страдают от повышенной усталости, слабости, непостоянных признаков гастродуоденита, дискинезии кишечника, еюнита (воспаление тощей кишки). Выраженность интоксикации зависит от массивности попадания цист в организм человека, длительности болезни.

Возможно повышение температуры, воспаление региональных лимфоузлов, аденоидов. Действием токсинов при лямблиозе на нервную систему объясняется резкая смена настроения, раздражительность, головокружение, снижение артериального давления.

В детском возрасте при обследовании неврологи обнаруживают нервные тики, навязчивые движения (гиперкинез), склонность к обморокам. Изменения кожи заключаются в повышенной сухости с шелушением, зудящих высыпаниях в виде пузырьков, кератозе, крапивнице, других видах дерматита.

Заподозрить лямблиоз у пациента необходимо при упорном блефарите и конъюнктивите (воспалении век и оболочек глаза). Аллергические проявления иногда доходят до астматического бронхита и бронхиальной астмы.

Как выявляют лямблиоз лабораторными способами?

Из приведенных клинических симптомов лямблиоза видно, что пациенты с подобными проявлениями могут длительно лечиться у гастроэнтеролога, невролога, окулиста, дерматолога, аллерголога-иммунолога. УЗИ, холецистография только подтвердят наличие повреждения гепатобилиарной системы, но не помогут в выявлении причины.

Общие лабораторные методы мало специфичны для лямблиоза, но показывают уровень нарушений:

• В общем анализе крови обычно настораживает моноцитоз и эозинофилия.
• Среди биохимических тестов выявляется снижение белка крови (как альбуминов, так и глобулинов), рост фермента щелочной фосфатазы.
• В анализе кала обнаруживаются копрологические признаки воспаления и нарушения переваривания: много жировых включений, непереваренные волокна, слизь, лейкоциты, эритроциты.

Современный уровень диагностики требует обязательного проведения паразитологического анализа на лямблиоз. Учитывая этапность развития микроорганизма диагноз должен подтверждаться выявлением в кале цист лямблий, в содержимом двенадцатиперстной кишки — вегетативных форм. Для этого проводят микроскопию мазков взятого материала.

Начиная с подросткового возраста, микроскопическим способом можно выявить лямблии в желчи, ее исследуют после дуоденального зондирования. Эта процедура у детей невозможна. Микроорганизмы обнаруживаются на стекле (инвитро) по характерным признакам, для улучшения выявляемости лямблиоза используется специальная окраска.

Инфекционисты рекомендуют для более точной выявляемости учитывать цикличность размножения и выделения форм паразита с испражнениями. Для этого лучше сдать анализ повторно за месяц от трех до пяти раз с перерывами в 1–2 недели.

Метод прост в проведении не требует больших затрат. Забор кала производится в специальную стерильную емкость. Необходимо взять подозрительные скопления слизи, частицы с измененным цветом. Цисты обнаруживают при доставке в течение суток. Обнаружить вегетативную форму лямблий значительно сложнее, поскольку они погибают через 60 минут после дефекации. Значит, материал должен быть доставлен как можно быстрее или забор следует производить в лечебном учреждении.

Косвенное значение имеет исследование кала на кишечную флору. Подсчет показывает способность лямблий снижать долю бифидо- и лактобактерий, стимулировать рост прочих микроорганизмов, активизировать появление патогенных стафилококков, стрептококков, грибков.

Лямблии — распространённые паразиты. Каждый второй ребёнок, посещающий детский сад, школу, подвержен риску заболевания. Каждый пятый взрослый – носитель. Основной источник заражения — вода.

Лямблии и лямблиоз

Выделяют два цикла развития паразита: трофозоит и циста. Функционал цисты – распространение. При поддержании необходимой влажности живет 70 дней в окружающей среде. Устойчива к концентрации хлора, используемой для обработки воды.

При реакции с секрецией желудка оболочка цисты растворяется, приобретает форму трофозоита. Десять личинок паразитов провоцируют инфицирование. Трофозоит при помощи присоски крепится к стенкам кишечника, становится цистой – делает невозможным выявление вегетативной формы в анализах кала при лямблиозе.

Методы исследования

Известны способы, позволяющие диагностировать заболевание у детей и взрослых. Обследования не дают 100% гарантированного результата. Важно подходить к процессу комплексно. Начальные шаги определит врач на основании жалоб, наличествующих симптомов.

Диагностика лямблиоза проводится прямыми и косвенными способами. В первом случае постановка диагноза основана на обнаружении цист, их ДНК; во втором — антител, вырабатываемых организмом, защищаясь от инфицирования.

Врач назначает способы диагностики:

• копрограмма;
• биопсия;
• анализ на иммуноглобулины;
• анализ на антиген;
• ПЦР;
• фиброгастродуоденоскопия;
• энтеротест;
• биохимическая гепатограмма;
• ультразвуковое исследование печени.

Рассмотрим методы, сравним результативность.

Копрологические исследования

Копрограмма — исследование кала специальными реагентами.

Цистогенез (образование новых личинок) — процесс непрерывный, учитывая комфортную для размножения среду кишечника, в которую паразит заносится с водой, продуктами. Общий инкубационный период — 2 недели. При особо острых формах цисты попадают в кал на 5-7 сутки после заражения.

Рекомендуют проводить анализ с промежутком в 1 неделю на протяжении 4-5 недель. Учитывается «слепой» период – цисты могут отсутствовать. Посуда для сбора материала должна быть чистой, плотно закупориваться.

Paraset

Наряду с традиционным методом копрограммы используют прибор Paraset, увеличивающий шанс обнаружить паразитов. В пробирку наливается смесь эфира и формалина, закручивающаяся вместе с 1 г кала.

В лаборатории образец помещается в центрифугу. При скорости вращения 3000 оборотов в минуту лямблии проходят через фильтр, скапливаются в нижней части пробирки. Способ даёт быстрый результат, повышает достоверность исследования.

Инвазивные методы

Биопсия – ценный для диагностики метод, дорогостоящий. По анализу с высокой точностью можно диагностировать лямблиоз у взрослых, исключить подозрения на опухоль в желудочно-кишечном тракте. Основан на изучении небольшого кусочка ткани определенного органа.

Энтеротест

Используется для детской диагностики. Пациент глотает капсулу из желатина, внутри которой нейлоновая нить. Личинки паразитов налипают к нити. После выводятся из организма с каловыми массами, исследуются в лаборатории.

Дуоденальное зондирование

Фиброгастродуоденоскопия (дуоденальное зондирование) — манипуляция, проводимая врачом в стационарных условиях для извлечения и изучения содержимого двенадцатиперстной кишки.

Подготовка к исследованию проводится в течение 5 дней. В этот период прекращается приём желчегонных, слабительных, стимулирующих пищеварение лекарств.

Во время исследования при помощи зонда извлекается 20-25 мл желчи. Важно немедленно произвести микроскопическое исследование материала. Срочность необходима – вегетативные формы лямблий гибнут через 30 минут после извлечения. Метод трудоёмок, малоэффективен, применяется редко. Исследование назначают детям с 10 лет при условии тщательной подготовки к анализу. Переносится процедура тяжело, может оказать пагубное влияние на детскую психику.

Обнаружение лямблий в кале методом ПЦР. Экспериментальный метод молекулярной биологии. В основе лежит многократное копирование определенного участка ДНК. В природе подобным образом образуются раковые опухоли. В результате копирования должно получится количество генетического материала, достаточное для визуального анализа.

Копируется заданный участок ДНК, если он есть в исследуемом материале (кале). Лямблиоз диагностируется при наличии в кале ДНК паразита. Позволяет поставить диагноз в период отсутствия цист. Уровень достоверности метода — 98%. Исследование дорогостоящее, проводится в клиниках крупнейших городов.

Косвенные способы диагностики

Анализ на иммуноглобулины – серологическая диагностика относится к косвенным методам. Изучается сыворотка крови. Исследование показывает наличие антител, вырабатывающихся организмом в ответ на заражение. Анализ определяет инфекцию уже через 2 недели после заражения. Кровь из вены берётся натощак.

Различают IgM и IgG. Если обнаружено антитело первой группы – в организме происходит острая фаза патогенного процесса, если второй – хроническое течение, M и G – свидетельство хронической формы лямблиоза в период обострения. Количество антител повышается с интенсивностью заражения.

На уровень антител влияет ряд факторов, что иногда дает ложноотрицательные результаты. Пример: у детей с сильно сниженным иммунитетом, рецидивирующим заболеванием антитела не обнаруживаются. При перекрестной реакции с антителами на других паразитов дает ложноположительный результат. Достоверность анализа — 75-80%.

Анализ кала на антиген (ИХА и ИМХ)

Достоверность метода близка к 100%. С помощью новейшей технологии выявляется антиген лямблий. Тест проводится быстро, особой подготовки не требует. Отсутствие субъективных факторов позволяет выявить цисты и вегетативную форму. В процессе исследования вмешательства в организм не происходит, что делает его удобным для детской диагностики. Исследуемый материал предоставляется в течении трёх суток (возможна заморозка).

Печеночная проба

Биохимическая гепатограмма используется в качестве эффективной альтернативы при невозможности проведения других анализов. Подходит для детской диагностики. Представляет обследование печени на основании результатов анализа венозной крови. Помогает выявить лямблии в печени (копрологические исследования ложноотрицательны).

Ультразвуковое исследование печени позволяет выявить поражение органа, использовать результаты для постановки диагноза.

Дисбактериоз

Анализ на дисбактериоз – лабораторная диагностика, в процессе которой исследуют каловые массы. Лямблия агрессивно воздействует на микрофлору желудочно-кишечного тракта, вызывает дисбактериоз, кандидоз. Грибы Candida – источник витаминов В, необходимые для жизни паразитов. У детей до 3 лет выявляется патогенная флора. Дисбактериоз — возможный симптом лямблиоза.

Сравнение методов

Большая часть лабораторий предоставляет исследование, определяющее антитела к паразитам. Анализ ошибочно диагностирует ложноположительный результат, быстро подтверждать с его помощью выздоровление недостоверно – IgG могут проявляться через полгода после окончания лечения.

Исследование кала на цисты распространённый, но не массовый способ диагностики. Если анализ совпадает со «слепым» периодом, в котором выделение цист не происходит, то анализ – ложноотрицательный. Следует повторить обследование через 3 дня (при необходимости до трех раз, либо по одному анализу в неделю на протяжении 4-5 недель).

Анализ на антиген обладает высокой достоверностью в сравнении с другими методами. Минус – процедура отсутствует в перечне услуг многих клиник. Проверочный тест на лямблиоз должен проводиться минимум через три недели после выздоровления – антиген 2 недели присутствует в организме, искажает результаты анализа.

ПЦР — отличный метод, но для большинства людей это чисто теоретическая возможность.

Профилактика лямблиоза

Для профилактики лямблиоза медики советуют тщательно мыть овощи и фрукты, употреблять только кипяченую воду, посещать периодически терапевта для уверенности в отсутствии угрозы здоровью.

Лямблиоз не смертельно опасное заболевание. Существенно подтачивает иммунитет человека. Следует быть осторожнее с домашними животными – могут являться переносчиками паразитов.

Диагностика лямблиоза — задача трудная. Патогомоничные симптомы у заболевания отсутствуют. Зачастую клиническая картина лямблиоза наслаивается на таковую других заболеваний желудочно-кишечного тракта. Не всегда удается по целому ряду причин выявить антитела в сыворотке крови. У микроскопического метода также имеются свои ограничения — неспособность отличать близко родственные виды лямблий, а периодичность выделения цист делает копрологический метод диагностики менее информативным.

Анализ на лямблии включает в себя анализ кала, крови и дуоденального содержимого:

1. Микроскопия нативного (неокрашенного) и окрашенного раствором Люголя мазка на предмет обнаружения цистных форм в оформленных и прецистных форм паразита в жидких испражнениях. При поносе и в дуоденальном содержимом выявляются вегетативные формы возбудителей.
2. Обнаружение вегетативных форм лямблий при дуоденальном зондировании. Дуоденальная биопсия является наиболее надежным методом диагностики.
3. Выявление антител к возбудителю в сыворотке крови с применением ИФА и РНИФ является более чувствительным методом. В некоторых лабораториях производятся анализы на выявление антигенов паразитов в кале. Данная методика при диагностике лямблиоза является более предпочтительной, чем поиск цист в фекалиях больного.
4. Высокочувствительным считается молекулярно-генетический метод.
5. Лямблии культивируются на искусственных питательных средах, но данная методика на практике не применяется.

В связи с отсутствием 100% чувствительности каждого из вышеперечисленных методов диагностика лямблиоза должна проводиться комплексно.

Рис. 1. На фото лямблии (вегетативная форма паразита, трофозоиты).

Паразитологическое исследование

При подозрении на заболевание сдаются анализы на лямблии: исследуются фекалии и дуоденальное содержимое. В фекальных массах выявляются цисты, при поносе (в жидких фекальных массах) выявляются и цисты и трофозоиты, в дуоденальном содержимом выявляются только трофозоиты (подвижные вегетативные формы паразитов).

Рис. 2. Лямблии под микроскопом.

Рис. 3. На фото подвижные вегетативные формы лямблий (на фото вверху) и циста паразита (фото внизу).

Копрологический метод исследования

Копрологический метод исследования (анализ кала на лямблии) является наиболее доступным, но менее информативным. С его помощью выявляются цисты паразитов, выделяемые больным с фекальными массами с 5 — 7 дня заболевания прерывисто, через каждые 2 — 21 день (в среднем через 8 — 14 дней).

В «немой» период выделение цист прекращается. Это обстоятельство требует неоднократного исследования каловых масс и применения других лабораторных методик. В свежих фекальных массах, собранных за 15 — 20 минут до начала исследования, в 5% случаев выявляются вегетативные формы лямблий. В течение получаса или часа вегетативные формы погибают, а цисты «съеживаются» и сливаются с детритом, что делает невозможным их обнаружение.

Анализ на лямблии должны сдавать больные с заболеваниями желудочно-кишечного тракта со склонностью к хроническому течению, с сопутствующей нейроциркуляторной дисфункцией, с длительной эозинофилией и аллергическими заболеваниями.

Оптимизация копрологического исследования может быть достигнута следующим путем:

• проведение 4 — 5 кратного анализа кала на лямблии с интервалами 7 — 8 дней;
• исключение на 5 — 7 дней приема противопаразитарных препаратов;
• при невозможности доставить в лабораторию свежесобранный кал рекомендуется применение консервантов с расчета на одну часть кала три части консерванта;
• при запорах необходимо накануне проведения анализа кала на лямблии принять слабительное средство (гуталакс, сенаде и др.) и/или желчегонные препараты.

Рис. 4. На фото вегетативные формы паразитов — трофозоиты (электронная сканирующая микроскопия).

Рис. 5. Трофозоит (фото А) и цисты лямблий (фото В).

Микроскопия дуоденального содержимого

В дуоденальном содержимом при лямблиозе выявляются подвижные формы лямблий (вегетативные формы, трофозоиды) с большей частотой, чем в фекалиях. Однако если лямблии паразитируют в более низких отделах тонкого кишечника, получаются отрицательные результаты исследования. Исследования дуоденального содержимого должно проводиться одновременно с исследованием кала. В последнее время данный вид исследования применяется редко.

Рис. 6. На фото вегетативные формы (трофозоиты) Lamblia intestinalis, меченные антителами (флуоресцентное окрашивание, непрямая РИФ).

Иммунологические методы исследования

Анализ крови на лямблии сдается с целью выявления специфических иммуноглобулинов. Считается, что основным фактором патогенности Lamblia intestinalis (основным иммуногеном) является антиген Аг GSA-65, на основе которого созданы современные тест-системы, которые применяются для диагностики данного заболевания.

Методы иммуноферментного анализа (ИФА) и иммунофлуоресценции (РНИФ) являются перспективными в лабораторной диагностике лямблиоза. С их помощью выявляются сывороточные иммуноглобулины классов G и M больных и носителей и антигены в пробах фекалий. Чувствительность и специфичность данных методов диагностики лямблиоза составляет более 90%.

• Иммуноглобулины IgM и IgG появляются в крови с 12 — 14 дня заболевания. Наличие одновременно иммуноглобулинов IgM и IgG говорит о наличии у больного лямблиоза. После санации IgM исчезают, а IgG сохраняются до двух месяцев.
• УровеньIgM (при отсутствии IgG) говорит о наличии острого лямблиоза у больных, инвазия у которых произошла не более 3-х месяцев назад.
• Уровень IgG (в сочетании или без IgM) указывает на хроническое течение лямблиоза или на начальную стадию реконвалесценции острого лямблиоза.

Чем выше уровень антител в сыворотке крови больного, тем чаще наблюдается отрицательное цистовыделение.

Антитела не определяются у детей с лимфатико-гипопластическим диатезом и у больных с неэффективными механизмами гуморальной защиты, что способствует хронизации инфекционного процесса. Лечение лямблиоза в данном случае проводится по индивидуальным схемам.

Анализ на лямблии с одновременным использованием серологических и копрологических методов дает возможность более качественно выявлять заболевание. Диагностика лямблиоза только на основании результатов копрологических методов исследования считается неоправданной.

Рис. 7. На фото цисты Lamblia intestinalis.

Биопсия кишечника

Биопсия тонкого кишечника является ценным диагностическим методом исследования, позволяющая выявит и оценить степень повреждения слизистой оболочки и обнаружить паразитов. Методика используется в крайних случаях.

Рис. 8. При лямблиозе повреждаются ворсинки слизистой оболочки тонкого кишечника. На фото слева микроскопия биопсийного материала больного лямблиозом. На фото справа лямблии продвигаются к ворсинкам кишечника.

Дополнительные методы диагностики лямблиоза

При заболевании у больного проводится общий анализ крови.

Рис. 9. Эозинофилия говорит о развитии аллергических реакций у больного лямблиозом (фото слева). При длительном и тяжелом течении заболевания развивается анемия (фото справа).

Дифференциальная диагностика лямблиоза

Лямблиоз следует отличать от бактериальных и вирусных гастроэнтеритов. Схожую картину дают кишечные гельминтозы, бактериальная и амебная дизентерия.