Содержание
Глава 37. Возбудитель сифилиса
Treponema pallidum – возбудитель сифилиса включен в род Treponema (от лат. trepo – поворачивать, nemo – нить).
Т. pallidum открыта Ф. Шаудином в 1905 г. Большой вклад в изучение сифилиса внесли И. И. Мечников, П. Эрлих, Д. К. Заболотный и др.
Морфология. Т. pallidum – спиралевидная нить размером 8-18 × 0,08-0,2 мкм с мелкими, равномерными завитками. Число завитков 12-14. Концы трепонемы заострены или закруглены. Трепонемы подвижны. Обладают четырьмя видами движения. По Романовскому – Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет, поэтому они называются Т. pallidum – бледная трепонема. Плохое окрашивание объясняется малым содержанием нуклеопротеидов. Спирохеты можно выявлять в препаратах, окрашенных по Бурри, серебрением. Кроме того, их изучают в живом состоянии – в темном поле.
Возбудители сифилиса спор и капсул не имеют (см. рис. 4).
Культивирование. Бледные трепонемы очень требовательны к питательным средам. На искусственных питательных средах они растут только в присутствии кусочков мозга или почек кролика и асцитической жидкости. Растут медленно, 5-12 дней при температуре 35-36° С в анаэробных условиях. Бледные трепонемы хорошо размножаются в курином эмбрионе (поперечным делением). При выращивании на искусственных питательных средах трепонемы теряют вирулентность. Такие культуры называются культуральными. Культуры, выращенные в курином эмбрионе, называют тканевыми. Они обычно сохраняют вирулентность.
Ферментативными свойствами трепонемы не обладают. Однако культуральные штаммы различаются между собой по способности образовывать индол и сероводород.
Токсинообразование. Не установлено.
Антигенная структура. Бледная трепонема содержит несколько антигенных комплексов: полисахаридный, липидный и протеиновый. Серогруппы и серовары не установлены.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Бледные трепонемы малоустойчивы. Температура 45-55° С губит их через 15 мин. К низким температурам они устойчивы. При замораживании сохраняются до года. Спирохеты чувствительны к солям тяжелых металлов (ртути, висмута, мышьяка и др.). Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их в течение нескольких минут. Они чувствительны к бензилпенициллину, бициллину и др. Под влиянием некоторых факторов внешней среды и антибактериальных препаратов трепонемы могут образовывать цисты. В такой форме они длительно находятся в организме в латентном состоянии.
Восприимчивость животных. В естественных условиях животные сифилисом не болеют. Однако на обезьянах, как показали И. И. Мечников и Э. Ру, можно воспроизвести клиническую картину сифилиса: на месте введения образуется твердый шанкр. В настоящее время показано, что при заражении кроликов, морских свинок на месте введения или в другом месте на коже образуются язвы. На кроликах путем пассажей можно длительное время сохранять выделенный штамм трепонем.
Источники инфекции. Больной человек.
Пути передачи. Контакт бытовой (прямой контакт), преимущественно половой путь. Иногда сифилис может передаваться через предметы (посуду, белье). От больной сифилисом матери заболевание передается через плаценту ребенку (врожденный сифилис).
Патогенез. Входными воротами являются слизистые оболочки половых путей и ротовой полости.
Первичный период – спирохеты попадают на слизистую оболочку, и после инкубационного периода (в среднем 3 нед) на месте внедрения образуется язва, которая характеризуется плотными краями и дном – твердый шанкр. Образованию твердого шанкра сопутствует увеличение лимфатических узлов. Первичный период продолжается 6-7 нед.
Вторичный период – возбудители сифилиса по лимфатическим и кровеносным путям распространяются по всему организму. При этом на коже и слизистых оболочках образуются розеолы, папулы, везикулы. Продолжительность этого периода – 3-4 года.
Третий период – развивается при нелеченом сифилисе. В этот период в органах, тканях, костях, сосудах образуются грануляционные разрастания – гуммы или гуммозные инфильтраты, склонные к распаду. Этот период может продолжаться несколько лет (в скрытой форме). Больной в этот период незаразен. При нелеченом сифилисе (в некоторых случаях), спустя много лет, может наступить поражение центральной нервной системы: при поражении головного мозга – прогрессивный паралич, при поражении спинного мозга – спинная сухотка. Эти заболевания возникают при локализации трепонем в мозговой ткани, что приводит к тяжелым органическим и функциональным изменениям в организме.
Иммунитет. Естественного иммунитета нет. При заболевании сифилисом развивается "нестерильный" инфекционный иммунитет. Его называют шанкерный, так как при повторном заражении твердый шанкр не образуется, но все последующие периоды развиваются. При сифилисе обнаруживают IgC и IgM, а также реагины IgE, которые в присутствии кардиолипидного антигена связывают комплемент.
Профилактика. Санитарно-просветительная работа, раннее выявление больных сифилисом. Специфическая профилактика. Не разработана.
Лечение. Пенициллин, бициллин, биохинол и др.
Контрольные вопросы
1. Опишите морфологию спирохет и методы окраски.
2. Что такое твердый шанкр?
3. Какой материал для исследования Вы будете брать в разные периоды заболевания сифилисом?
4. Каков иммунитет при сифилисе?
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выявление бледной трепонемы и серодиагностика.
1. Содержимое твердого шанкра (первичный период).
2. Содержимое розеол, папул, везикул (вторичный период).
3. Кровь (вторичный, третий и четвертый периоды).
Способы сбора материала
2. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).
3. Серологический: 1) реакция Вассермана (РСК);
2) осадочные реакции.
4. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ).
Ход исследования
Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента (табл. 52). Отличается она тем, что при реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген. Например, липоидный экстракт из бычьего сердца – кардиоантиген. Ввиду неспецифичности антител, реагирующих с этим антигеном, их называют реагинами. Реакция с неспецифическим антигеном объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидными экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент, и поэтому гемолиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза – положительная реакция – серологически подтверждает диагноз "сифилис". При постановке серологических реакций нужно использовать также специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные.
Таблица 52. Постановка реакции Вассермана
Примечание. 1) ++++ полная задержка гемолиза; – гемолиз; 2) антиген № 1 неспецифический (липоидная фракция бычьего сердца); 3) антигены № 2 и 3 специфические, приготовленные из культур трепонем.
Осадочные реакции. 1. Реакция Кана. Сыворотку больного инактивируют при 56° С 30 мин. К антигену (экстракт липидов бычьего сердца) прибавляют 0,6% холестерина для повышения чувствительности реакции (табл. 53).
Таблица 53. Схема постановки реакции Кана
Учет результата: появление преципитации отмечается как положительная реакция.
2. Реакция Закса – Витебского (цитохолевая осадочная реакция) является модификацией реакции Кана. Авторы применили более концентрированный антиген, к которому прибавлен холестерин, что способствует более быстрому образованию преципитата.
Реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Это наиболее специфичная реакция в диагностике сифилиса.
В настоящее время разработана методика этой реакции: взвесь трепонем получают из измельченного яичка кролика, зараженного Т. pallidum, и сохраняют в специальной среде, не угнетающей подвижность трепонем. В пробирку вносят 1,7 мл взвеси тканевых трепонем, добавляют 0,2 мл испытуемой сыворотки, 0,1 мл свежего комплемента.
Контроли: в 1-ю пробирку вместо испытуемой сыворотки вносят сыворотку здорового лица; во 2-ю – наливают инактивированную сыворотку морской свинки. Все пробирки помещают в эксикатор или анаэростат, заполняют их смесью газов (1 объем углекислоты и 19 объемов азота) и ставят в термостат при 35° С. Затем исследуемый материал наносят на стекло и изучают подвижность трепонем в темном поле. Принцип реакции заключается в том, что сыворотка больного сифилисом в присутствии комплемента угнетает движение бледной трепонемы. Определяют процент иммобилизованных трепонем.
Результат считают положительным, если иммобилизованных трепонем выше 50%; слабоположительным – от 30-50%; отрицательным – ниже 20%.
Контрольные вопросы
1. Какой материал используют для лабораторной диагностики сифилиса в разные периоды заболевания?
2. Каковы методы лабораторного исследования при диагностике сифилиса?
3. Какими антигенами нужно пользоваться при постановке реакции Вассермана?
4. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции иммобилизации трепонем (РИТ)? Какой материал берут у обследуемого, что в нем определяют?
Выделение возбудителя сифилиса обычно не проводят. Основа диагностики сифилиса — методы, направленные на обнаружение возбудителя в материале микроскопией и выявление AT серологическими реакциями. Материал для исследования — отделяемое шанкра, пункта™ лимфатических узлов, соскобы розеол, кровь, СМЖ. Наиболее оптимальные микроскопические методы — темнопольная и фазово-контрастная микроскопия. Также возможно приготовление гистологических препаратов, импрегнированных серебром по Морозову или Левадити (трепонемы выглядят как чёрные спирали).
Для ранней диагностики сифилиса применяют иммунофлюоресцентные методы; наибольшее распространение получила РНИФ с адсорбированной сывороткой. Основное значение в микробиологической диагностике сифилиса имеют серологические методы. Их разделяют на неспецифические и специфические.
Основные методы диагностики сифилиса — РСК, предложенная А. Вассерманном, и VDRL-реакция [от англ. Venereal Disease Research Laboratory, лаборатория изучения венерических заболеваний] — специализированная флоккул я цион пая проба на предметных стёклах с использованием кардиолипин-лецитин-холестеринового Аг. В качестве метода экспресс-диагностики применяют тест на реагины плазмы, представляющий собой РА частиц угля, нагруженных кардиолипином.
Специфические тесты диагностики сифилиса
Наибольшее значение имеют реакция иммобилизации бледной спирохеты (реакция Нельсона-Мейера) и РА (микроагглютинации).
Лечение сифилиса
Разработка терапии сифилиса послужила отправной точкой для изучения этиотропных химиотерапевтических препаратов. До открытия первых препаратов сифилис лечили солями ртути и йодидом калия. В начале XX века П. Эрлих открыл производные мышьяка — сальварсан (препарат «606») и неосальварсан (препарат «914») — препараты, обладающие противосифилитическим действием.
Внедрение ртути в терапию сифилиса произошло под влиянием Парацельса, что породило высказывание «одна ночь с Венерой и вся жизнь с Меркурием (символ ртути)». Позднее в терапию сифилиса включили производные висмута.
Проблему лечения первичного и вторичного сифилиса решило открытие пенициллинов, в настоящее время составляющих основную группу противосифилитических средств. При третичном сифилисе применяют симптоматические средства.
Профилактика сифилиса. Предупреждение сифилиса.
Средства специфической иммунопрофилактики сифилиса отсутствуют; общие меры во многом аналогичны предупреждению большинства заболеваний, передающихся половым путём.
– Вернуться в оглавление раздела "Микробиология."
91. Патогенные спирохеты (возбудители сифилиса, возвратного тифа, клещевого боррелиоза): морфология, культуральные и тинкториальные свойства, биохимические особенности, антигенная структура и токсинообразование, эпидемиология, патогенез и клиника. Микробиологическая диагностика. Профилактика и лечение.
Спирохеты – тонкие, спирально завитые бактерии длиной от нескольких до нескольких сотен микрометров, подвижные, грамотрицательные, хемоорганотрофы. Выделяют три основных типа движений – быстрое вращение вокруг продольной оси, сгибательные, штопорообразные (винтообразные). Медицинское значение имеют представители родов Treponema, Borrelia, Leptospira и Spirillum.
Род представлен туго закрученными спиралевидными бактериями длиной 5 – 20 мкм. Наиболее известный патогенный для человека вид – T. pallidum (бледная трепонема), подвид T. pallidum pallidum – возбудитель сифилиса.
Патогенные трепонемы дифференцируют по патогенности для различных видов лабораторных животных, способности ферментировать маннит, утилизовать лактат и образовывать специфические метаболиты.
“Lues Venerae” – “любовная чума” – одно из названий сифилиса (люес).
Возбудитель сифилиса имеет спиралевидную форму с одинаковыми по высоте завитками (более 10). Характер подвижности – плавные винтообразные и сгибательные движения (Treponema -с лат. – сгибающаяся нить). По Романовскому – Гимзе окрашиваются в бледно – розовый цвет (pallidum – с лат.- бледная). Легко выявить при помощи темнопольной микроскопии и после инпрегнации серебром.
Культуральные и биохимические свойства.
Бледная трепонема чрезвычайно прихотлива к условиям культивирования и не способна длительно расти на питательных средах. Отличается очень медленным темпом размножения. В лабораторных условиях можно культивировать на кроликах, заражая их интратестикулярно (орхит с накоплением трепонем). Биохимические свойства изучены слабо в связи с проблемами культивирования и для характеристики T.pallidum практически не используются.
Трепонемы имеют перекрестно – реагирующие антигены с другими спирохетами (боррелиями, лептоспирами). В связи с наличием в составе клеточных стенок бледных трепонем фосфолипидов (кардиолипин и др.), аналогичных клеткам млекопитающих, в ответ на эти антигены в организме вырабатываются специфичные не только для возбудителя сифилиса, но и перекрестно- реагирующие на кардиолипин и другие фосфолипиды тканей человека и животных так называемые вассермановские антитела. Они выявляются в РСК с кардиолипиновым антигеном (из сердец животных). Специфические антитела к возбудителю сифилиса выявляют в РНИФ и иммуноблоте.
Антиген Вассермана – фосфолипид, входящий в состав митохондриальных мембран (кардиолипин). Его получают из бычьего миокарда – ткани, богатой митохондриями. Благодаря антигенной общности с тканевыми фосфолипидами, антитела к кардиолипину трепонем реагируют с тканевым (митохондриальным) кардиолипином. Истинные аутоантитела против тканевого кардиолипина образуются при “антимитохондриальном (антифосфолипидном) синдроме”, обусловливая положительные реакции Вассермана (ложноположительные – применительно к возбудителю сифилиса) при коллагенозах (системная красная волчанка, ревматоидный артрит), проказе и других тяжелых инфекциях, связанных с повреждением тканей, при гемолитической анемии, при наркоманиях.
Развитие сифилиса определяется двумя основными механизмами – склонностью к генерализации (высокая инвазивность) и периодической активизацией длительно персистирующего в организме возбудителя (“выход из засады”).
Из-за неустойчивости возбудителя во внешней среде заражение происходит при прямых контактах ( в подавляющем большинстве случаев половым путем). Проникая через слизистые оболочки и незначительные повреждения кожи, возбудитель быстро проникает в ткани, распространяется лимфогенно и далее – гематогенно (генерализация).
Первые признаки болезни (первичный сифилис) возникает после инкубационного периода (в среднем 3 – 4 недели). В месте внедрения (первичной инвазии) происходит размножение возбудителя и возникает твердый шанкр – плотный безболезненный красноватый узелок, превращающияся в язву. Одновременно в результате проникновения трепонем в лимфатические узлы развивается регионарный лимфаденит и в дальнейшем – полиаденит. Генерализация инфекции происходит еще до появления шанкра и лимфаденита, т.е. сифилис с самого начала – системное заболевание.
После затихания клиники первичного сифилиса через некоторое время ( от нескольких недель до нескольких месяцев) происходит рецидив инфекции, связанный с полиорганной репликацией трепонем (вторичный сифилис). Наблюдаются поражения кожи и слизистых (вторичные сифилиды, в которых находится большое количество трепонем), поражения внутренних органов, лимфоузлов, костей, суставов и мн.др. С учетом многообразия поражений вторичный сифилис называют “великим мистификатором”.
После вторичного сифилиса у части больных вновь формируется латентный сифилис (возбудитель уходит в подполье на годы), который у половины носителей может переходить в третичный сифилис. Он характеризуется формированием очагов гранулематозного воспаления – гумм, содержащих мало трепонем (практически не заразных). Распад гумм приводит к разрушению костных и мягких тканей и поражению жизненно важных органов. В отличие от первичного и вторичного сифилиса, третичный сифилис – хронический процесс, который никогда не завершается самоизлечением.
Мало известно о факторах патогенности T.pallidum и механизмах, позволяющих ему длительно ускользать от иммунологического надзора. Обнадеживает,что этот возбудитель сохраняет высокую чувствительность к антибиотикам. Современный сифилис по- прежнему хорошо поддается лечению, если процесс не достигает необратимых органических поражений.
При первичном и вторичном сифилисе возбудитель можно обнаружить в очагах поражений микроскопией. Более оптимальны для выявления бледных трепонем темнопольная и иммунолюминесцентная микроскопия. При первом методе необходимо исключить возможные артефакты (нити фибрина, например), наличие сапрофитических трепонем. T.refringens колонизирует наружные половые органы, отличается высокой подвижностью и отсутствием сгибательных движений. T.denticola колонизирует ротовую полость, ее завитки короче и направлены под более острым углом. В ротовой полости человека встречается также T.vincentii, которая в ассоциации с другими микроорганизмами может вызывать язвенно – некротическую ангину.
Кроме возбудителя сифилиса имеются очень близкие в генетическом и антигенном отношении трепонемы других подвидов T.pallidum, вызывающие поражения человека в странах с жарким климатом (фрамбезию, бержель, пинту).
При окраске по Романовскому – Гимзе T.pallidum окрашивается в розовй цвет, непатогенные трепонемы – в синий или фиолетовый, T.refringens прокрашивается фуксином в красный цвет. Люминесцентная диагностика широко применяется для выявления трепонем в различных клинических материалах. Среди методов выявления возбудителя наибольшей чувствительностью и достаточной специфичностью обладает ПЦР.
Основные методы диагностики – серологические, т.е. выявление сывороточных антител. Применяют РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигеном, флоккуляционные пробы (микроагглютинационный тест на кардиолипиновые антитела), РНГА. Более специфичными и чувствительными тестами являются тесты, основанные на непрямой иммунофлюоресценции (РИФ), реакция иммобилизации бледной трепонемы, ИФА на основе рекомбинантных белков трепонем.
В серодигностике сифилиса необходимо учитывать серонегативность первичного сифилиса в первые недели заболевания. Необходимо сочетание методов , основанных на выявлении антител как против кардиолипиновых, так и трепонемных антигенов. Кардиолипиновые тесты быстро становятся серонегативными после элиминации возбудителя (спустя несколько месяцев), антитрепонемные антитела сохраняются намного дольше. Существенное значение для определения активности процесса имеет определение антитрепонемных IgM – антител (при выявлении врожденного сифилиса -особо, поскольку IgM – антитела не переходят через плаценту от матери к плоду; при исследовании спинномозговой жидкости – для диагностики нейросифилиса и др.).
Чаще применяют депонированные пенициллины с пролонгированным действием, при непереносимости – макролиды, тетрациклины, цефалоспорины.
Специфической профилактики не существует.
Морфология и классификация.
Спиральные, имеющие до 10 неправильной формы крупных завитков, грамотрицательные бактерии с вращательно- поступательным характером движений. Анаэробы, часто требующие сложных сред для культивирования.
Патогенные для человека боррелии являются возбудителями возвратных тифов (рекуррентных лихорадок) или боррелиозов. B.recurrens передается человеку вшами, вызывает эпидемический или вшивый возвратный тиф. Остальные боррелиозы человека делят на две самостоятельные группы – аргасовые клещевые боррелиозы (АКБ), вызываемые более 12 видами боррелий, и иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ), вызываемые B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii, B.afzelii и некоторыми другими.
АКБ связаны с аргасовыми клещами рода Ornithodorus, обитающими в тропических и субтропических регионах Африки, Азии, Америки, и характеризуются повторяющимися приступами лихорадки (как при малярии). ИКБ вызывают клещи рода Ixodes (группа I.ricinus / I.persulcatus), распространены преимущественно в лесной зоне в Евразии и Америке.
Представители этого рода взыскательны к условиям культивирования, особенно боррелии группы ИКБ. Для них необходимы факультативно – анаэробные условия, температура плюс 33 градуса Цельсия, специальные среды (BSK-2), содержащие среду 199, глюкозу, альбумин, цистеин, кроличью сыворотку, желатин и другие компоненты.
Имеют перекрестно- реагирующие антигены с другими спирохетами, родо – и видоспецифические антигены. Выделяют H- (жгутиковые) флагеллиновые антигены (обладают слабой специфичностью) и поверностные белковые антигены (OspA, OspC, более специфичны, используют для межвидовой и внутривидовой идентификации).
После присасывания клеща боррелии со слюной попадают в макроорганизм, размножаются во входных воротах инфекции, поражая кожу (эритема) и ближайшие лимфоузлы (фаза первичной адаптации). Преодолев кожный и лимфатический барьеры, боррелии попадают в кровь, вызывают спирохетемию, проявляющуюся общетоксическим синдромом (стадия первичной диссеминации). По мере прогрессирования процесса боррелии проникают через гематотканевые барьеры (в т.ч.- через гематоэнцефалитический барьер) и вызывают поражение различных органов и систем. В ряде случаев инфекция приобретает хронический характер, вызывая поражения нервной и сердечно – сосудистой систем, опорно – двигательного аппарата, вторичные поражения кожи и др. Существует недостаточно обоснованное на современном этапе мнение о связи преимущественных клинических проявлений с геновидовой принадлежностью боррелий ( B.garinii – преимущественно неврологические проявления, например).
ИКБ – облигатно- трансмиссивные природноочаговые инфекции, распространенные преимущественно в умеренном климатическом поясе северного полушария, лесной ландшафтной зоне и связанные с присасыванием клещей рода Ixodes. Очаги ИКБ часто сопряжены с очагами клещевого энцефалита, поскольку имеют одних и тех же переносчиков в Евразии – клещей I.reticulatus (таежный клещ) и I.ricinus (европейский лесной клещ).
Боррелии можно выделить с использованием среды BSK2 у больных из очагов кожных поражений, из крови и спинномозговой жидкости (при менингиальных формах), при исследовании переносчиков (в т.ч. снятых с людей) и теплокровных хозяев (наибольшая высеваемость – из мочевого пузыря) в природных очагах.
Боррелии можно выявить в иксодовых клещах с помощью световой микроскопии (окраска по Романовскому – Гимзе), темнопольной и люминесцентной микроскопии, ПЦР.
Основной метод серологической диагностики – реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) с корпускулярным антигеном B.afzelii, позволяющим выявлять антитела к боррелиям группы ИКБ.
Применяют предупредительную терапию (при положительных результатах исследования присосавшегося клеща) и лечение больных ИКБ тетрациклинами, пенициллинами и цефалоспоринами. Мер специфической профилактики не разработано.