Исследование игх что это

В наши дни разработано множество способов диагностики рака. Одним из наиболее достоверных методов выявления онкологических патологий является ИГХ-исследование. Что это такое? Иммуногистохимия (сокращенно ИГХ) позволяет с высокой точностью обнаружить злокачественные клетки в материале, полученном с помощью биопсии. Как проводится такой тест? И как расшифровать его результаты? Эти вопросы мы рассмотрим в статье.

Описание процедуры

Учеными установлено, что клетки злокачественных опухолей вырабатывают специфические белки – антигены. Иммунная система воспринимает эти вещества, как чужеродные агенты и начинает вырабатывать против них антитела. Таким образом организм человека пытается бороться с опухолью.

На реакции антигенов и антител и основано ИГХ-исследование. Что это такое? При проведении иммуногистохимии берется на анализ кусочек ткани. Его обрабатывают антителами к различным видам злокачественных клеток. Затем материал изучают под микроскопом и наблюдают за реакцией.

Если в кусочке ткани содержатся раковые клетки, то их антигены вступают во взаимодействие с антителами. При этом в биоматериале отмечается свечение (флуоресценция). Это является признаком наличия злокачественных клеток. Такой метод позволяет выявить онкологические заболевания с точностью 100 %.

Методика анализа

Пациенту делают биопсию перед ИГХ-исследованием. Что это такое? Под местной анестезией из опухоли отщипывают кусочек ткани (биоптат). Этот материал и исследуют под микроскопом. В некоторых случаях на анализ берут ткани, удаленные в ходе хирургической или эндоскопической операции.

Затем биоптат обезжиривают и обрабатывают парафином. Это необходимо для сохранности материала. В результате получают парафиновые блоки, которые затем нарезают чрезвычайно тонкими слоями.

Полученные срезы обрабатывают препаратами с антителами к разным видам злокачественных клеток. Могут использоваться следующие наборы для анализа:

1. Малая панель. В этот набор входит до 5 антител.
2. Большая панель. Может содержать от 6 до нескольких десятков видов антител.

Выбор необходимых антител для исследования зависит от предполагаемого диагноза. В направлении на анализ лечащий врач указывает – какие именно виды антигенов необходимо выявить у пациента. В зависимости от этого и подбирают реагенты для теста.

Получить результаты анализа на руки можно спустя 1 – 2 недели после проведения исследования.

Что показывает анализ

Нередко пациентам назначаю одновременно гистограмму и ИГХ-исследование. Что это такое, и чем отличаются эти два вида анализов? При гистограмме биоматериал исследуют под микроскопом и определяют наличие раковых клеток. При иммуногистохимическом исследовании злокачественные новообразования выявляют с помощью реакции "антиген – антитело". Такой способ исследования считается более информативным.

ИГХ показывает не только наличие атипичных клеток. С помощью этого исследования можно выявить:

• разновидность новообразования;
• распространение онкологического процесса;
• расположение первичной метастазирующей опухоли;
• стадию рака;
• темпы роста опухоли.

Кроме этого, с помощью иммуногистохимии можно определить чувствительность раковых клеток к химиопрепаратам и облучению. Это позволяет выбрать наиболее эффективный метод лечения.

Показатели

В расшифровке ИГХ-исследования указывают концентрацию антигенов злокачественных новообразований. В норме такие белки должны полностью отсутствовать. Их наличие в биоматериале указывает на развитие опухоли. Чем выше концентрация антигенов, тем активнее происходит разрастание новообразования.

Кроме этого, в результатах анализа указывают разновидность атипичных клеток и их количество. Точно интерпретировать данные теста может только врач-онколог.

Выявление рака груди

Этот анализ назначают при подозрении на рак молочной железы. ИГХ-исследование в этом случае помогает выявить не только наличие злокачественных клеток, но и чувствительность рецепторов новообразования к гормонам. Ведь нередко рост опухоли молочных желез зависит от уровня эстрогенов и прогестерона. С помощью этого исследования можно также оценить необходимость назначения гормональных лекарств.

Для диагностики рака молочной железы используется специальный набор маркеров. В расшифровке анализа необходимо обратить внимание на концентрацию антигена Ki-67. По этому показателю можно судить о прогнозе заболевания, ведь он указывает на скорость роста опухоли.

Концентрация антигена определяется в процентах. В зависимости от уровня Ki-67 подбирается метод лечения:

1. Менее 15 %. Прогноз заболевания считается благоприятным. Возможно излечение с помощью гормональной терапии.
2. От 16 до 30 %. Умеренный рост новообразования. Распространение опухоли можно приостановить с помощью гормонов.
3. Более 30 %. Такая концентрация антигена свидетельствует о быстром росте раковой опухоли. Необходимо назначение химиотерапии.

Если показатель антигена составляет менее 10%, то в подавляющем большинстве случаев рост опухоли удается остановить с помощью гормонов. Крайне опасной считается концентрация Ki-67 более 90 %. Это указывает на запущенную стадию рака. В таких случаях заболевание чаще всего приводит к летальному исходу.

Применение в гинекологии

Нередко врачи назначают пациенткам ИГХ-исследование при дисплазии шейки матки. Эта патология сопровождается перерождением здоровых клеток в атипические. Такое состояние врачи оценивают как предраковое. Дисплазия 3 степени практически всегда приводит к образованию злокачественной опухоли на шейке матки.

ИГХ помогает оценить риск развития онкологических заболеваний у пациенток с дисплазией. Для исследования используют антитела к белкам p16INK4a и Ki-67.

При анализе определяют не только концентрацию антигенов, но и соотношение между уровнями вышеуказанных белков. Референсные значения показателей исследования индивидуальны и зависят от предполагаемого диагноза. Точно расшифровать результаты теста может только лечащий врач. Высокие показатели концентрации антигенов и соотношения между p16INK4a и Ki-67 указывают на большой риск развития рака шейки матки.

Где можно сдать

Где проводят ИГХ-исследование? Такой тест можно сделать во многих коммерческих медицинских центрах и лабораториях (например, в "Инвитро" или "Гемотесте"), а также в крупных онкологических медучреждениях. Проведение анализа не требует пребывания пациента в стационаре, за исключением тех случаев, когда исследование проводится после хирургического вмешательства.

Иммуногистохимия не входит в перечень услуг, которые предоставляются по полису ОМС. Поэтому такой анализ можно сдать только платно. Его цена варьируется от 4000 до 20 000 рублей. Стоимость теста зависит от количества антигенов, которые предстоит выявить в биоптате. Чем большее количество маркеров указано в направлении на анализ, тем выше цена исследования.

Иммуногистохимия – это специальный анализ для определения ракового заболевания. С его помощью находят антигены, выделяемые определённым видом раковых клеток. Вдобавок с помощью иммуногистохимии прослеживается реакция антигенов на лечение. Анализ составляет основу диагностики и терапии в современной онкологии.

Как работает метод

В названии метода соединились три отрасли – иммунология, гистология и химия. Для анализа используют химические вещества. Реактивы насыщены антителами, находящими раковые антигены. Антитело – это белок, его структура притягивает антиген. Белок окрашивают ферментами, красителями, которые проявляются при положительной реакции.

Теоретические основы иммуногистохимии заложены в 40-е годы 20-го века. С помощью флуоресценции находили антигены в замороженных клетках. Затем стали использовать окрашенные ферментами антитела. Установили соответствия цветовой реакции и типа раковых клеток. Также определили гормоны и их рецепторы.

Практическое применение методов ИГХ:

• Определение типа клеток;
• Изучение секреторных внутриклеточных процессов и особенностей клеточного синтеза;
• Определение гормонов и гормональных рецепторов.

• Прямой метод – маркированные антитела соединяются с искомыми антигенами.
• Непрямой, «антиген-антитело» – неотмеченные антитела находят антигены, потом их соединения обнаруживают вторичные отмеченные антитела.

Цвет реакции показывает статус опухоли.

Цель метода

Иммуногистохимическое исследование отвечает на три вопроса.

Что это такое

Специфический анализ помогает выяснить строение раковой клетки и идентифицировать по гистологическим признакам, к какому классу относится новообразование.

Где оно находится

Если точная локализация опухоли неизвестна, с помощью иммуногистохимии находят расположение по метастазу.

Как это лечить

С помощью анализа видна реакция антигенов на вещества препаратов химиотерапии. Так удаётся оценить, окажется ли действенным лечение указанным способом. Установить, к каким препаратам рак устойчив, можно прежде, чем химия попадет в организм человека. Таким образом, пациента избавляют от лишней интоксикации, а сразу назначают лекарство, о действенности которого заведомо известно. Если рак устойчив к химиотерапии, предстоит выбрать другой метод лечения.

Это помогает в лечении эстрогенозависимых опухолей при раке молочной железы.

Сложная структура железистых клеток включает признаки новообразований различной степени агрессивности. Эти опухоли бывают устойчивыми к химиотерапии и гормонам. Насколько агрессивно развивается опухоль, возможно установить по маркеру пролиферации в иммуногистохимическом тесте.

Как проходит процедура

На иммуногистохимический анализ попадает образец ткани, взятый с помощью биопсии. Это способ забора биоматериала с помощью тонкой иглы. Её вводят в тело пациента и шприц-системой втягивают ткань опухоли. Образец проходит подготовку:

• Фиксация с помощью парафина.
• Изготовление срезов.
• Распределение срезов по стеклам.
• Обработка образцов антителами и красителями.

Перед исследованием биоматериал хранится в формалине. Это позволяет использовать единственный образец долгое время, чтобы не травмировать пациента. Биопсия бывает болезненна, если опухоли расположены в труднодоступных местах. Злокачественные образования в головном мозге по возможности удаляют оперативно, на анализ попадает непосредственно опухоль. Важно сохранить материал, так как опухоли бывают размером до 1 см. По результатам теста строится программа лечения. Впрочем, в этом случае иммуногистохимия обладает преимуществом.

Положительные и отрицательные стороны

• Требуется минимум биоматериала и реактивов;
• Определяет рак на ранней стадии;
• Быстрый результат;
• Точность и достоверность.

Дополнительное преимущество – в возможности трехмерного моделирования. Ответная реакция на антитела видна через три часа. Окончательное заключение дается через 7-10 дней. По истечении этого времени будет точно установлен тип рака и стадия заболевания, а также его первичный очаг. Изменение цвета маркеров обычно не имеет разночтений при постановке диагноза. На итоговом бланке прописывают расшифровку результатов.

Достоверность зависит от метода окрашивания образца реактивами. Это делается автоматически и вручную. При ручном методе не исключён человеческий фактор, ошибки лаборантов. Лечащий врач подскажет, в какую лабораторию обратиться. Пациент может самостоятельно поинтересоваться, как проводится анализ в конкретном учреждении. Для достоверности результата он может проводиться повторно или в двух лабораториях.

Погрешность в результате возникает по вине пациента. Перед биопсией следует отказаться от гормональных препаратов и других лекарств, от физических нагрузок, придерживаться диеты. Внешние факторы влияют на результаты.

Применение метода в диагностике

Показания к анализу:

• Патологии репродуктивной системы, бесплодие;
• Активный опухолевый рост любой локализации.

Противопоказаний к анализу нет. Порой невозможно получить биоматериал для исследования из-за расположения опухоли.

Иммуногистохимия эндометрия – важное исследование для нахождения причин бесплодия. Его цель – найти антиспермальные клетки, препятствующие оплодотворению. Причиной бесплодия становится нечувствительность эндометрия к гормонам во время овуляции. При этом показатели гормонального фона в норме, антиспермальных тел нет. Иммуногистохимическая диагностика выявляет, что проблема в рецепторах эндометрия.

Трудно поддаются диагностике тимомы. Их деление на злокачественные и доброкачественные условно. Всё зависит от конкретного случая. Статус опухоли вилочковой железы, тимуса показывает исследование на антитела.

ИГХ при раке прямой кишки применяется, чтобы установить эпителиальный или эндокринный характер опухоли, наследственный фактор и прогноз. Методика определяет первичное ли заболевание и метастазы.

Расшифровка результатов основана на показателе степени злокачественности. Чем он выше, тем менее благоприятный прогноз. Патология – 85% содержания маркера, означает последнюю стадию заболевания с метастазами. Менее 10% – норма, благополучный исход лечения.

Другие маркерные методы

Онкологический диагноз всё же редко ставят по результатам единственного исследования.

Гистологический

Второй информативный анализ – гистология. Метод отличается от иммуногистохимии тем, что даёт представление только о клеточном строении. Гистологическим способом выделяют в одном материале несколько различных структур, к примеру, аденокарциномы. Злокачественное образование формируется из железистой ткани, которое выделяет жидкость. Исходя из типа жидкости, выделяют серозную и слизисто-секреторную. Клетки аденокарцином располагаются фолликулярно или папиллярно. Опухоль бывает твердой или с включениями цист, и уже классифицируется как цистаденокарцинома. Об этих характеристиках узнают по результатам гистологического исследования и корректируют лечение под конкретный тип опухоли.

Технология такая же, как при иммуногистохимии. Берут материал с помощью биопсии, покрывают парафином и разрезают образец на тонкие пластины. Готовые препараты также окрашивают, после чего патоморфолог изучает их под микроскопом.

Недостатки гистологического исследования – длительные сроки ожидания результата планового анализа, 10-14 дней. Срочный анализ делают за 30 мин.

Метод МГМ

Ещё один анализ, в основе которого лежит реакция на маркеры – молекулярно-генетический. Помогает установить отклонения в ДНК злокачественной опухоли, влияющие на её метастатическую и инвазивную активность, а также наличие наследственной предрасположенности или спорадической, спонтанной природы образования.

Гистология и иммуногистохимия – два основных метода постановки диагноза при раке, подтверждающие друг друга. Разница в результатах редка, так как иммуногистохимия включает исследование клеточного строения.

Часто после гистологического исследования лимфоузла пациента дополнительно направляют на иммуногистохимию. Под микроскопом материал изучает эксперт, который может что-то упустить. Либо структуру сложно идентифицировать. Метод ИГХ – помощь в спорной ситуации.

Лаборатории и стоимость

В России есть лаборатории, где можно сделать тест на иммуногистохимию.

Лаборатория компании «ЮНИМ», Инновационный центр Сколково, Москва – 28300 р. любой сложности, 19000 при раке молочной железы, срок 3 дня.

Лаборатория «Мелайн-Сервис», Москва:

• 6560 р. анализ на 1 антитело;
• 15980 р. анализ мягкотканных опухолей 6-10 антител;
• 27350 р. сложный анализ на 11-14 антител;
• 12620 р. – стандартное исследование молочной, предстательной железы, определение статуса эндометрия, 2-5 антител.

Центр молекулярной диагностики в Москве и с филиалами в регионах РФ:

• 5170 р. – 1 антитело;
• 12500 р. – 5 антител;
• 24000 р. – 10 антител.

Стоимость зависит от сложности исследования и вида рака.

ИГХ исследования – что это такое

ИГХ представляет собой методику, используемую в патологической анатомии для диагностики раковых и доброкачественных опухолей. Его назначают, когда установить точный диагноз стандартным гистологическим способом невозможно или необходима детализация клинически значимых параметров новообразований на молекулярном уровне.

Очень часто гистологии бывает недостаточно. В большинстве случаев причиной этому является крайне нетипичная структура патологического образования, что существенно затрудняет постановку точного диагноза. В частности, при лимфоме и лейкозе ИГХ делают практически всегда.

Нужно отметить, что всего насчитывается около 70 разновидностей лейкозов и лимфом. Верифицировать некоторые их них удается лишь путем нескольких исследований – гистологического, иммуногистохимического и молекулярно-генетического.

Еще один диагноз – «мелкокруглоклеточная опухоль» – может означать 13 злокачественных образований, имеющих разное течение и прогноз. Кроме того, каждое из них требует разработки особой схемы химио- и радиотерапии. Дифференцировать такие опухоли помогает единственный метод – иммуногистохимия.

Суть методики

При развитии любого опухолевого процесса формируются чужеродные организму белки – антигены, в противовес которым иммунная система человека вырабатывает антитела – иммуноглобулины. Они прикрепляются к антигенам и связываются с эпитопами – основными частями антигенных макромолекул. Антитела выполняют сразу две функции: связывающую и эффекторную. Проще говоря, они напрямую мешают антигенам наносить вред и одновременно активируют комплемент, запуская ответную реакцию иммунитета.

Роль антигенов в данном случае принадлежит атипичным опухолевым клеткам. Перед тем как провести иммуногистохимическое исследование, срезы биометариала маркируются специфическими антителами к ним. В целях дальнейшей визуализации эти антитела окрашиваются ферментами. Далее, используя высокоточную оптику, наблюдают за поведением испытуемых клеток.

Если белковые соединения, помеченные как антитела, связываются с опухолевыми клетками, будет видно свечение – флюоресценцию, свидетельствующую о наличии искомых веществ. Так выявляют, например, рецепторы к гормонам и онкомаркеры. При подозрении на рак молочной железы таким образом обнаруживаются рецепторы к эстрогену и прогестерону.

Кому показано

Основным показанием к назначению иммуногистохимии являются злокачественные новообразования. В онкологии данный метод применяется для поиска метастазов и патологических микроорганизмов, определения вида и локализации опухоли, а также с целью оценки активности патологического процесса. С помощью ИГХ можно установить окончательный или, реже, промежуточный диагноз при раке кожи (меланоме), саркоме, лимфогранулематозе, лимфолейкозе и лейкозе, типировать степень злокачественности процесса. Последнее крайне важно при нейроэндокринных образованиях, которые еще называют «скрытыми убийцами» из-за того, что их очень трудно распознать на ранних стадиях.

В отдельных случаях иммуногистохимический анализ позволяет установить источник метастазов, когда локализация первичного очага неизвестна, а также провести дифференциальную диагностику при нескольких новообразованиях разного происхождения.

ИГХ может назначаться при бесплодии, хронических патологиях эндометрия, матки и яичников, привычных выкидышах. Ее целесообразно делать и в том случае, если беременность не наступает после нескольких процедур ЭКО.

Иммуногистохимия поможет обнаружить наличие клеток, препятствующих зачатию, и определить дальнейшую тактику лечения бесплодия.

Методом ИГХ оценивают и лекарственную чувствительность путем выявления:

• рецепторов половых гормонов – эстрогена, прогестерона и андрогенов. Необходимо при поражении женской репродуктивной системы;
• фактора роста опухоли Her2/neu. Биомаркер и терапевтическая мишень агрессивных типов рака груди;
• соматостатиновых рецепторов 2а и 5 типа, важных при карциноидах;
• мембранного белка иммуноглобулинов PD-L1, гена ALK и рецептора тирозинкиназы ROS. Данные показатели исследуются преимущественно при немелкоклеточном раке легких;
• микросателлитной нестабильности;
• индекса пролиферативной активности.

Трудно переоценить важность микросателлитной нестабильности (MSI), которая существенно расширяет прогностические и лечебные возможности у пациентов со злокачественными поражениями ЖКТ. Новообразования с низкой MSI медленнее растут и реже дают метастазы. Поэтому своевременное выявление MSI позволяет избежать назначения агрессивной, но заведомо неэффективной терапии.

ИГХ исследования: что это такое и как проводятся

Для выполнения ИГХ необходим биоматериал, забор которого осуществляется в основном путем взятия биопсии. Несколько реже его получают в ходе эндоскопической или классической открытой операции. Способ изъятия пораженной ткани зависит от типа и локализации рака. При этом следует учесть, что брать материал на анализ следует до начала терапии. В противном случае возможно искажение результатов исследования.

Этапы проведения анализа:

1. Полученный биоматериал фиксируют, обрабатывая в формалине, и отправляют в лабораторию.
2. Затем его обезжиривают и подвергают повторной фиксации, после чего заливают парафином.
3. Далее производится микротомирование – с готовых парафиновых блоков делаются тонкие срезы, которые помещаются на специальные стекла. Толщина среза составляет не больше 1 мкм.

Когда ткани лежат на стеклах, их обрабатывают раствором антител. Количество их видов ограничено несколькими десятками. Исследование реакций с применением до 5 разных антител проводится на малой панели. При более масштабном эксперименте нужна большая панель.

В ходе ИГХ рак любого органа проявляется эффектом свечения – флюоресценции, – благодаря чему выявляются злокачественные клетки, определяются рецепторы гормонов или другие заданные параметры.

Расшифровка

Изучением срезов биоматериала занимаются врачи-патологоанатомы. Они же первыми составляют прогноз, исходя из выявленного типа и объема онкогенных клеток. При расшифровке результатов особое внимание обращают на показатель К-67 – специфический белок, антиген ракового процесса. Он вырабатывается только при активном делении клеток, а в состоянии покоя не продуцируется.

К-67 – это именно тот онкомаркер, что показывает степень озлокачествления процесса. Если его уровень в процентном содержании составляет 85% и выше, то заболевание прогрессирует стремительно и с высокой вероятностью вскоре приведет к смерти.

Благоприятным будет прогноз при К-67=10%. В случае грамотно составленного плана терапии есть все шансы на полное выздоровление, зачастую без риска рецидива. При К=30% констатируют среднюю степень тяжести болезни, что означает достаточно быстрый рост рака. С помощью курсовой химиотерапии его можно замедлить и даже остановить.

Однако К-67 – это не единственный показатель, который указывается в медицинском заключении. Также записываются антитела, к которым выявлены соответствующие антигены, тип и количество последних.

Полученное заключение врач-патологоанатом передает лечащему онкологу, который подбирает лечение. Для оценки его эффективности иммуногистохимию проводят еще раз после завершения терапевтического курса.