Содержание
Микрореакция на сифилис является наиболее распространенным методом диагностики заболевания и основывается на образовании связи между особыми белковыми структурами — фосфолипидами и антителом. Доступность и простота проведения исследования позволяет за короткий промежуток времени обследовать большое количество пациентов.
Что из себя представляет данный анализ?
В организме в ответ на внедрение патогенной микрофлоры или при повреждении собственных клеток образуются особые белковые элементы – антитела. При диагностике сифилиса методом микрореакции (МРП) в крови пациента пытаются найти связь между антителами и фосфолипидами — белками, входящими в состав всех клеточных мембран.
Иммунный ответ в виде выработки антител формируется как раз тогда, когда фосфолипиды из клеточных мембран попадают в кровь. Это происходит при проникновении в ткани человека бледной трепонемы – возбудителя сифилиса и ряда других инфекций.
Чтобы при заражении сифилисом антитела начали вырабатываться, требуется определенное время. Это происходит не мгновенно, а, самое раннее, спустя 3-4 недели после инфицирования. Именно поэтому этот анализ не подходит для ранней диагностики. Но благодаря легкости проведения и невысокой стоимости МРП относится к скрининговым исследованиям, предназначенным для выявления болезни среди широких масс населения.
Диагностика сифилиса этим методом состоит из следующих этапов:
- подготовка больного к сбору материала;
- сдача крови в лаборатории. Для анализа требуется кровь пациентов, которую чаще всего берут из вены, но в некоторых лечебных учреждения используется и из пальца;
- на специальном оборудовании отделяют плазму крови от клеточных элементов;
- в полученную биологическую жидкость добавляют антиген с визуализирующим агентом. Чаще всего для этого используется уголь;
- при наличии в сыворотке фосфолипидных антител происходит их склеивание с введенным антигеном, что проявляется образованием черных хлопьев, указывающих на положительную реакцию. При отсутствии в организме антител к фосфолипидам хлопья не образуются.
Также проводится количественная оценка наличия бледной трепонемы в организме с вычислением показателей титра. Для этого микрореакцю на сифилис выполняют в разведениях. В процессе исследования сыворотку крови пациента разводят физиологическим раствором сначала в два раза, потом в четыре и так далее, каждый раз удваивая разведение и проводя тест на выявление антител в материале. При этом отмечается разведение, на котором микрореакция последний раз остается положительной. Например, 1:320 означает, что даже при разведении в 320 раз в сыворотке крови еще содержатся антитела. Это цифра является показателем титра и указывается в анализе. Чем выше значение титра, тем активнее протекает патологический процесс в организме.
Количественное определение титра важно для контролирования результативности терапии и диагностирования окончательного излечения сифилиса. В течение года после курсовой терапии должно отмечаться падение титров в 4 раза. Контрольные анализы проводят через 3 месяца, полгода и год после лечения.
Показания к исследованию
Микрореакция преципитации на сифилис выполняется в диагностических целях и при проведении скрининговых исследований. Для выявления и констатации наличия инфицирования бледной трепонемой анализ МРП назначают следующим группам пациентов:
- имеющие клинические проявления болезни. В первую очередь, это больные с характерными изъязвлениями на половых органах и участках тела, контактирующих с партнером в процессе полового акта. Также обращается внимание на увеличенные близкорасположенные к очагу лимфатические узлы;
- лицам с любыми высыпаниями или язвочками в области гениталий;
- сексуальным партнерам и членам семьи больного;
- новорожденным, родившимся от матерей, болеющих или имеющих сифилис в анамнезе;
- больным любой другой патологией, передающейся при интимных контактах.
Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.
Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).
Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.
Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.
Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.
Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).
Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.
Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.
Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.
ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.
Преимущества метода
Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.
ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.
Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.
Недостатки метода
К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.
В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.
ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.
Показания к назначению и выявляемые заболевания
Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:
- Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Анализируемый биоматериал и особенности его забора
Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.
Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.
Сроки готовности результатов ИФА
При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.
Расшифровка иммуноферментного анализа
Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).
Анализируемые показатели
- IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
- IgM и IgA ( совместное присутствие ) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
- IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Возможные результаты ИФА
В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.
Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).
Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.
Не забывайте о подготовке к анализу: кровь для ИФА берут натощак, за две недели пациенту желательно прекратить прием антибиотиков и других противовирусных препаратов. Если человек принимает какие-либо лекарства постоянно, нужно сообщить об этом врачу.
Материалы для сбора
Определение антител к бледной трепонеме (Treponemapallidum) в иммуноферментном исследовании (ИФА) в сыворотке крови с кодом + (определение антител к бледной трепонеме (TreponemaPallidum) в нетрепонемных тестах (RPR, РМП) (качественное и полуколичественное исследование) в сыворотке крови.
КСР – комплекс серологических реакций, включающий в себя два анализа на сифилис разными методами – МРП (см. выше) и ИФА.
Иммуноферментный анализ(ИФА)- наиболее чувствительный и специфичный метод лабораторной диагностики сифилиса. Основан на выявлении специфического комплекса антиген – антитело, образуемого при соединении сифилитических антигенов с трепонемнымиантителами сыворотки исследуемой крови.