Пцр вич точность

Способ лечения болезни, вызванной вирусом иммунодефицита человека, не найден до сих пор. Зато диагностика достигла серьезных успехов. Анализ на ВИЧ, выполненный методом ПЦР, – один из вариантов выявления вируса в организме.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, – один из современных методов диагностики ВИЧ. В его основе лежит способность нуклеиновых кислот к саморепродукции. Клетка любого живого организма включает белок и нуклеиновые кислоты:

• РНК- рибонуклеиновую,
• ДНК- дезоксирибонуклеиновую.

Эти макромолекулы хранят генетический код. Если концентрация вирусных клеток в крови низкая, в пробе содержатся не целые цепочки ДНК, а их отдельные «кирпичики» – нуклеотиды. Полимеразная цепная реакция выявляет даже такие «обломки» вирусных клеток. Этот анализ крови на ВИЧ позволяет получить результат на ранних сроках после возможного заражения, когда клинические первые симптомы еще не появились.

Наиболее точный результат можно получить, используя для анализа венозную кровь. Перед тем как пройти обследование, за пару дней следует отказаться от жирной пищи и алкоголя. За 2 недели прекратить прием иммуностимулирующих препаратов.

Пробу биоматериала расщепляют в медицинском лабораторном реакторе. Затем фракции обрабатывают ферментами. Реактивы объединяются с ДНК вирусной молекулы и дублируют ее. Из одной клетки получается 2, из 2-х – 4, далее 8. Число растет в геометрической прогрессии. Цепная реакция позволяет в короткий срок увеличить количество вирусного компонента и сделать его заметным для лаборантов.

Нормой является отрицательный результат анализа, который выглядит так: «ДНК вируса не обнаружено». Это и есть референсное (среднестатистическое) значение.

Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР имеет неоспоримые преимущества, но есть и существенные недостатки. К первым относятся:

• Высокая точность. Крайне мала вероятность получить ложноотрицательные результаты.
• Универсальность. Для исследования подходит не только кровь, но и другие биологические жидкости (влагалищные выделения, сперма). Слюна, моча также используются, но точность результата будет ниже. В этих средах концентрация вирусных клеток незначительна.
• Широкий спектр анализа. Один образец биоматериала можно исследовать на несколько заболеваний.
• Скорость выполнения. Полимеразная цепная реакция относится к срочным методам диагностики. Ответ можно узнать уже на следующий день.
• Достоверность составляет 80 %. С помощью метода ПЦР можно обнаружить вирусные частицы, даже если их концентрация невелика. Это позволяет диагностировать заболевание на ранних стадиях и своевременно начинать терапию.
• Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции. Время, когда ВИЧ обнаруживают в крови при помощи ПЦР, – 10-14 дней после предполагаемого заражения. Это стандартный отрезок для диагностики вируса иммунодефицита. Антитела на этом этапе еще не обнаруживаются; метод ИФА не работает.
• Нет возрастных ограничений. Можно проводить это тестирование ребенку с момента рождения.

Недостатки метода ПЦР при диагностике ВИЧ:

• Более высокая стоимость в сравнении с иммуноферментным анализом 3 поколения.
• Требуется сложное медицинское оборудование.
• Погрешность 20% в связи с высокой чувствительностью реакции. При аутоиммунных заболеваниях, злокачественных опухолях, хронических инфекциях ПЦР может дать ложноположительный результат.

Кому проводится ПЦР

Проведение этого анализа на ВИЧ рекомендовано в следующих случаях:

• Нужен ранний ответ для предварительного диагностирования. ПЦР помогает подтвердить или опровергнуть результаты ИФА.
• Иммуноблоттинг дал положительный результат. Если первым проводится ПЦР анализ, то обязательно подтверждение результата методом иммунного блоттинга. Исследования дополняют друг друга. Используя сразу 2 метода, медики исключают возможность ошибок.
• Когда позитивный ВИЧ-статус подтвержден, ПЦР помогает отследить эффективность проводимой терапии.
• Используется для исследования донорской крови на наличие антител к ВИЧ.
• Проводить ПЦР можно даже детям до года. Этот метод применяется, чтобы выяснить ВИЧ-статус новорожденных, мамы которых являются носительницами вируса. Тест, проведенный в первые дни жизни, покажет, произошло ли внутриутробное инфицирование. Заражение могло случиться, когда ребенок проходил по родовым путям. Положительный ВИЧ-статус, приобретенный младенцем в процессе родов, удастся выявить через 2 – 3 недели.

Сколько времени делается анализ ПЦР, и где можно сдать

Проведение анализа ПЦР на ВИЧ и расшифровка результатов не требуют много времени. Забор крови занимает 5-7 минут. В стандартном случае лаборанту достаточно 24 часов, чтобы подготовить справку. Диагностирование занимает не более 8 часов, остальное время требуется на оформление. Пациент получает отчет на следующий рабочий день. Экспресс-тестирование выполняют в течение 2 часов.

Исследования на ВИЧ указанным способом не проводят по полису ОМС. Получить эту услугу бесплатно в государственной поликлинике нельзя. Зато практически все коммерческие лаборатории обычно имеют необходимое оборудование и реагенты. Проведение анализа ПЦР часто входит в общий скрининг на ВИЧ. Цена комплексной диагностики составляет от 600 до 1000 руб.

Пройти процедуру можно анонимно. В регистратуре пациенту дают индивидуальный номер, по которому он узнает результат. Современные медицинские центры отображают все данные на своем сайте в личном кабинете клиента.

Портал о Печени

Существуют различные способы обнаружить вирус иммунодефицита, именно анализ на ВИЧ ПЦР методом заслуживает особого внимания. Он основывается на том, что находит генетический материал возбудителя. Это исключает ошибку практически гарантированно. Исторически методика планировалась как чисто научный способ, но нашла применение.

ПЦР через сколько можно сдать на ВИЧ при подозрении на заражение? Отличие как раз и заключается в оперативности, потому прописать такой анализ могут на самых ранних стадиях развития болезни. Если потенциальный больной пришел к врачу сразу же после возможного инфицирования и признаков жизнедеятельности вируса еще нет, то будет назначен именно ПЦР анализ. Он работает уже с четвертого дня присутствия вирионов в крови. Для точности рекомендуется анализ примерно на 14-й день после опасного взаимодействия.

Какова достоверность ПЦР на ВИЧ через 2 недели? Как установлено, достоверность определения наличия вируса методом полимеразно-цепной реакции очень не вызывает сомнений. С 80-х годов прошлого столетия именно этот тест массово применяется и считается одним из точнейших, его разработчик получил Нобелевскую премию. Лауреат предвидел перспективность полимеризации уже в ту эпоху.

Происхождение анализа методом ПЦР

Датой рождения можно назвать 1983 год. Метод основан на том, чтобы вычленить фрагмент нуклеотидной цепи чужака, это может быть как рибонуклеиновая кислота так и дезоксирибонулеиновая, искусственно размножить его и исследовать. Специалист по ПЦР ДНК ВИЧ берет и размножает по принципу комплементарности, выстраивая довольно длинную цепочку, которую удобно рассмотреть и подвергнуть тестированию. ПЦР РНК ВИЧ осуществляется так же, только берется плазма или сыворотка.

Возникновение этого подхода в широкой практике явилось настоящим прорывом и позволило совершить большой шаг в вопросе помощи больным. Таким образом стало реальным помогать людям на самых ранних этапах, обнаруживать недуг еще до появления специфичных антител. С этого дня истории медицины, ВИЧ уже не является приговором.

Диагностика ВИЧ ПЦР

Для исследования методом полимеразно-цепных реакций надо взять совсем немного инфекционного материала, потому поставить диагноз можно быстро и безотлагательно.

Диагностика ВИЧ ПЦР точна, требует виртуозного уровня квалификации от работников, которые занимаются исследованием. Современные лабораторные помещения много раз проверяют данные, которые получают, прежде чем сообщить итог обратившемуся.

Диагностика ВИЧ инфекции ПЦР методом занимает один день или несколько, все зависит от загруженности персонала.

Есть некоторые желательные условия к сдающему анализ, чтобы получить максимально правдивый ответ:

• Не есть 8-10 часов, если к этому нет противопоказаний;
• За пару дней отказаться от алкоголя;
• Сутки до не практиковать спортивных упражнений.

Это все, что должен сделать испытуемый. Остальное – дело медработников. Стерильность в помещении должна быть 100%, референц-лаборатории ведущих центров регулярно проверяются на предмет чистоты и исправности стерилизаторов. ПЦР применяют и для того чтобы удостовериться в диагнозе, и для подсчета вирусных частиц в крови, то есть вирусной нагрузки.

Через сколько можно сдать анализ ПЦР на ВИЧ?

Многие все же не доверяют результатам, которые получаются в первые дни после контакта с возбудителем. Анализ на ВИЧ ПЦР через какое время считается самым оптимальным? Чем больше времени проходит с момента попадания вируса в тело, тем проще его выявить. Но не следует забывать, что и лечить больного со временем все сложнее. Если достоверно известно, что был контакт с больным человеком, то не следует тянуть больше 14 дней. Если нет информации о контактах с положительными на ВИЧ людьми, то анализ нужно сдать сразу при появлении первых симптомов.

ПЦР ВИЧ на 9 неделе имеет высокую точность, но на этом сроке могут предложить и другое исследование, ИФА. Этот альтернативный анализ более дешевый, также точный, но основан на исследовании антител, которые, к сожалению, появляются не сразу после инфицирования. В идеале, для подтверждения диагноза, проводят оба анализа, сроки устанавливает врач.

Качественный ПЦР на ВИЧ дает понимание, действительно ли вирус иммунодефицита присутствует в организме. Этим же методом можно определить и другие инфекции.

Как проходит анализ на ВИЧ методом ПЦР?

Анализ на ВИЧ методом ПЦР процедура не сложная и начинается с забора венозной крови у пациента. Исследовать могут как ДНК, так и РНК, но сама процедура взятия материала будет одинаковой.

С помощью специальных реагентов, праймеров, в стерильной лаборатории проводится анализ. За единицу времени количество копий вырастает до определенных значений, эти значения оценивает сотрудник лаборатории. Проводится также определение возбудителя, чтобы установить, что речь идет о том самом вирусе. Таким образом, метод дает возможность качественного и количественного исследования биоматериала.

При каких условиях диагностика ВИЧ инфекции ПЦР методом обязательна?

Так как анализ не из дешевых, его проводят не всем и не всегда. Правда, есть ряд случаев, когда он обязателен. Донорам, к примеру, обязательно нужно сдать анализ на ВИЧ ПЦР. Также анализ проводят в случае непредвиденных аварий в медицинских учреждениях и лабораториях, и при этом есть риск контактов здоровых людей с кровью инфицированных.

В большинстве случаев исследование проводится на добровольных началах. Обязать могут только медицинских работников и, иногда, педагогов и других работников сферы образования, которые контактируют с маленькими детьми. Также основанием для принудительного обследования могут послужить признаки резкого снижения иммунитета.

Результаты анализа ПЦР на ВИЧ их точность и достоверность

Тест ПЦР на ВИЧ достоверность показывает очень высокую, до 99%. Следует напомнить, что точность зависит и от срока. На пятый день после проникновения вируса в тело, точность составляет примерно 80%. Уже к 14 дню этот показатель повышается до 98%. Далее доходит до 99%.

Практика показывает, что ложноотрицательных результатов практически не бывает, порой случаются ложноположительные. ПЦР на ВИЧ точность 99% дает вполне хорошее представление о состоянии здоровья человека, контактировавшего с ВИЧ-позитивными людьми.

Анализ ПЦР ВИЧ на раннем этапе дает шанс оперативно среагировать на проблему, и своевременно принять меры по продлению активной жизни. Провериться будет не лишним, если есть риск заражения.

ПЦР на ВИЧ отрицательный, что это значит?

ПЦР на ВИЧ отрицательный, как уже было сказано выше, практически не может быть ложным. В таких ситуациях врач ставит диагноз «здоров» и дальнейшее обследование не показано, если, конечно, ос временем не появится клинических симптомов заболевания.

Что делать при положительном результате анализа ПЦР при ВИЧ?

Ситуация совсем иная, когда ПЦР тест на ВИЧ дал положительный результат. В этом случае можно рассчитывать на ошибку, но, чтобы подтвердить эту гипотезу, необходимо продолжить обследование. Повторный тест и дальнейшее исследование другими методами провести нужно обязательно, и врач обязательно назначит анализы. Игнорировать требования врача нельзя.

ПЦР при ВИЧ проводится на ранних стадиях, а также иногда назначается при прохождении пациентом антиретровирусной терапии.

Перспективы теста ПЦР

Метод ПЦР в диагностической медицине можно считать перспективным, действенным и точным. Пока что единственным его минусом можно считать высокую стоимость. Исследование генетического материала вирусной частицы дает возможность с высокой точностью подтвердить или опровергнуть наличие инфекции, а также предсказать скорость развития заболевания. ДНК тест на ВИЧ, или же РНК анализ, дает точность до 99%, причем на самых ранних этапах. Раннее диагностирование ВИЧ дает огромные шансы на успешную терапию.

Результат оценивают после 14 дней с предполагаемого момента проникновения вируса, предположительно это может незащищенный половой контакт или инъекции иглой сомнительной чистоты. Отрицательный результат при анализе ПЦР можно считать достоверным, в то время как положительный подлежит дополнительной проверке.

*Если вам не повезло и анализ ПЦР на ВИЧ показывает положительный результат, не стоит отчаиваться. В настоящее время существует целый список эффективных антиретровирусных препаратов, которые способны замедлить развитие болезни и продлить жизнь на 30-40 лет.

Автор

Владимир Черкесов

Врач-гастроэнтеролог кандидат медицинских наук

Методика ПЦР-диагностирования первоначально была разработана 35 лет назад американским ученым Кари Муллисом. Изобретатель исследования получил международную Нобелевскую награду в 1993 году за свое новаторство. Оно стало незаменимым для любой лабораторной деятельности.

ПЦР используется в молекулярной биологии, чтобы произвести множество копий (амплифицировать) небольших участков ДНК. ДНК-полимераза может добавлять нуклеотид только в существовавшую ранее 3-OH-группу. Поэтому ему нужен праймер, к которому он может добавить первый нуклеотид. Это требование позволяет определить конкретный участок последовательности шаблонов, который необходимо диагностировать. В конце реакции ПЦР конкретная последовательность будет накапливаться в миллиардах копий (ампликонов).

ПЦР включает в себя процесс нагрева и охлаждения, называемый термическим циклом, который выполняется специализированной техникой. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является относительно простой методикой. Она усиливает ДНК-матрицу для получения специфических фрагментов ДНК in vitro (анализ в пробирке). Традиционные методы клонирования последовательности ДНК в векторе и ее репликации в живой клетке часто требуют проведения исследований от нескольких дней до нескольких недель работы. Но получить результаты амплификации последовательностей ДНК с помощью ПЦР можно спустя пару часов.

Большинство биохимических анализов, используемых в диагностике инфекционных заболеваний, требуют достаточно большого количества биологического материала. Для ПЦР данное условие не является обязательным. Таким образом, ПЦР может обеспечить более чувствительное обнаружение патогена. И более высокие уровни амплификации определенных последовательностей за меньшее время с достаточно ограниченным количеством биоматериала. Эти особенности делают технику чрезвычайно полезной. Не только в фундаментальных исследованиях, но и в личных целях. Включая тестирование генетической идентичности, судебную экспертизу, промышленный контроль качества.

Основная ценность анализа заключается в возможности выявления патологий, передаваемых половым путем, до развития первых признаков. К анализу методом ПЦР прибегают при необходимости ранней диагностики ВИЧ-инфекции. А также определения РНК вируса в крови донора. Благодаря высокой чувствительности анализа получить ответ можно спустя 7-14 дней после предполагаемого инфицирования. Достоверность диагностики будет достигать от 85 до 98%. Однако, тест ПЦР назначается не всем. Поскольку является достаточно дорогостоящим исследованием. Главное, требует наличия дорогого оборудования и определенных профессиональных навыков от сотрудников лаборатории. Если пациент ранее не находился в ситуациях, связанных с повышенным риском заражения, проведение полимеразной реакции не целесообразно.

Полимеразная реакция качественного типа на ВИЧ

Проведение качественного ПЦР на ВИЧ позволяет определить присутствие в организме вирусного заболевания. Пациент может получить результат в виде следующих отметок: положительный, ложноположительный, отрицательный. Но исследование не дает возможности определить количество копий ретровируса. Качественный анализ не проводится пациентам, у которых ранее была диагностирования инфекция. Не назначается в качестве контроля над эффективностью противовирусной терапии.

ПЦР количественного типа на ВИЧ

Проводится с целью определения копий РНК вируса в биологическом материале пациента. Количественный ПЦР назначается только больным с ранее выявленной инфекцией, как мониторинг проводимого лечения.

ПЦР в реальном времени

Используется в лабораторной диагностике для образования копий участков ДНК. Также для одновременного количественного исследования и детекции последовательности ДНК в биоматериале. По сути, диагностика представляет собой количественный ПЦР.

На заметку!

В различных лабораториях можно встретить несколько формулировок диагностики: «ПЦР количественное определение» и «ПЦР в режиме Real-time».

Оба анализа являются идентичными.