Тест на антитела к вич

Тест на ВИЧ позволяет выяснить, присутствует ли вирус иммунодефицита человека, его антигены или антитела к белкам ВИЧ в крови, моче или слюне [1] . Анализом на вирусную нагрузку называется определение количества копий РНК вируса иммунодефицита человека в миллилитре плазмы крови, которое позволяет судить о стадии заболевания и эффективности антиретровирусной терапии [2] [3] .

Содержание

Принципы [ править | править код ]

Разработаны различные принципы тестирования, из них два используются наиболее часто: обнаружение антител и выявление белков, характерных для вируса. Результат теста принято называть положительным (вирус обнаружен), отрицательным (вируса нет) или сомнительным (маркеры вируса есть, но не все, результат не может считаться положительным) [4] [5] .

Антитела к ВИЧ [ править | править код ]

По некоторым данным, у 99 % инфицированных антитела обнаруживаются в течение первых 12 недель (6—12 недели) после первичного контакта с вирусом [6] , по другим данным: у 90—95 % антитела к ВИЧ появляются в течение 3-х месяцев после заражения, у 5—9 % — через 6 месяцев, 0,5—1 % — в более поздние сроки [7] ).

Период с ложноотрицательным результатом антител называется «периодом окна». Уже в это время инфицированный человек может быть источником инфекции [8] .

Первыми выявляемыми антителами являются «gag» (англ. group antigen ) белки ВИЧ — р24 и р17, а также прекурсор р55. Образование антител анти-р24 сочетается со снижением уровней свободного антигена р24, выявляемого в крови до появления антител [9] [10] . Вслед за антителами анти-р24 появляются антитела против белков «Env» (англ. Envelope ) — gp160, gp120, p88, gp41 и гена «pol» (англ. Polymerase ) — p31, p51, p66. Могут определяться также и антитела против генов «vpr», «vpu», «vif», «rev», «tat», «nef» [11] [12] .

Наиболее изученными антителами являются антитела, направленные против белков «Env» — gp120, gp41. Они разделяются на два класса: тип-специфичные и групп-специфичные. Другая группа антител анти-gp120, участвующая в антител-зависимом цитотоксическом действии (англ. ADCC ) и уничтожении инфицированных ВИЧ-клеток CD4+, может уничтожать и неинфицированные клетки, рецепторы которых связаны свободным gp120, циркулирующим в крови — эффект, названный «Innocent bystanders» («Bystander killing») [13] [14] .

Тест-системы, определяющие иммунный ответ [ править | править код ]

Предварительным тестом на ВИЧ является ИФА, определяющий наличие в крови антител, которые вырабатывает организм для борьбы с вирусом. Этот тест обладает высокой надёжностью (около 90 %) и селективностью, хорошо отработанная технология сделала этот тест недорогим (себестоимость около 1 долл. США). Для анализа берётся небольшое количество крови из вены [15] .

Существуют также экспресс-тесты для анализа слюны и мочи, которые позволяют проводить тестирование без укола [16] . В России утверждён единственный тест на слюну (околодесенная жидкость) производства США. На родине производителя он прошёл испытания и получил сертификат FDA. В России его испытаниями занимался ГИСК Им. Л. А. Тарасевича в 2009 году [17] .

Выработка антител начинается в организме примерно в течение первого месяца после попадания вируса, затем их количество постепенно растёт. Спустя еще два-два с половиной месяца вырабатывается достаточная концентрация антител для надёжного определения. Поэтому во многих странах (в том числе и в России) перед тестированием пациента предупреждают, что достоверный результат определяется спустя 3—6 месяцев после контакта с вирусом (ок. 90—95 % людей спустя 3—4 месяца, 5—9 % людей спустя 6 месяцев, 0,5—1 % людей гораздо дольше).

Если ИФА показал положительный результат, его перепроверяют с помощью более точного теста иммуноблот. Этот тест имеет очень высокую чувствительность и достоверность (99,9 %), но иногда выдаёт ложноположительные срабатывания. Диагноз «ВИЧ-инфекция» ставится лишь при наличии двух положительных результатов одновременно: ИФА и Вестерн-блот (иммуноблоттинг) [15] .

Тест-системы, определяющие ДНК вируса [ править | править код ]

Самым распространённым из этой группы является тест под названием ПЦР (полимеразная цепная реакция). Обладает меньшей точностью (ок. 85 %), чем ИФА, однако может быть использован уже спустя 10 дней после возможной передачи вируса. Применяется в случаях, когда желателен ранний предварительный результат (до истечения 3 месяцев) или иммунный ответ не может служить показателем: у новорождённых, у пациентов, проходивших иммуносупрессорную терапию (отключение иммунного ответа). По результатам ПЦР диагноз не ставится [18] .

Новый тест TZA [ править | править код ]

Сотрудники Питтсбургского университета (University of Pittsburgh) разработали новый высокочувствительный тест для обнаружения скрытых вирусов [19] . Ведущий автор исследования Фалгуни Гупта (Phalguni Gupta) сообщил, что этот тест будет эффективнее и дешевле существующих методов диагностики ВИЧ. Тест назвали TZA – он делается быстрее и крови для него требуется меньше. Принцип действия TZA – поиск гена, который активируется только при репликации вируса. По результатам теста было установлено, что у пациентов, у которых ВИЧ никак себя не проявлял в результате антиретровирусной терапии, резервуары вируса значительно больше – примерно в 70 раз. Однако новый тест не заменит предыдущий полностью, поскольку у Q-VOA и TZA разный механизм действия, и в зависимости от конкретного случая нужно применять подходящий тест [20] .

Достоверность результатов анализа [ править | править код ]

Сомнительным (или неопределённым) результат выявляется в случае, если результат невозможно трактовать как однозначное наличие вируса (например, присутствия в сыворотке крови антител, перекрёстно реагирующих с белками ВИЧ). В таком случае часто рекомендуют пересдать тест через несколько недель или применить более специфические тест-системы.

Ложноположительным результатом называется ситуация, в которой вируса нет, а тест показал положительный результат. Это возможно для теста по методу ИФА, последующая проверка с помощью другой системы подтверждает отсутствие вируса [21] .

Ложноотрицательный результат — отрицательный показатель теста при том, что вирус присутствует. Такая ситуация может сложиться, если анализ проводится слишком рано, до истечения 3 месяцев (недостаточно антител в крови для срабатывания) [21] . Отрицательный результат даёт и анализ ПЦР во время проведения терапии против ВИЧ [22] , когда концентрация вирусов в крови становится ничтожной, ниже порога срабатывания.

СПИД [ править | править код ]

При помощи анализа наличия антигенов вируса или антител к белкам вируса невозможно установить стадию заболевания, определить, находится пациент в терминальной стадии (СПИД) или болезнь находится на более ранней стадии. Тест на ВИЧ лишь показывает наличие вируса или антител к вирусу в организме. Стадия приобретённого иммуного дефицита диагностируется при наличии как минимум двух ассоциированных оппортунистических заболеваний [23] .

Социальные аспекты и юридические нормы [ править | править код ]

Тестирование на ВИЧ очень важно с точки зрения сохранения здоровья человека [24] . Результаты могут повлиять на планирование жизни и карьеры, отношение к собственному организму, сексуальные практики и точку зрения на употребление вредных или опасных субстанций. Вместе с тем результат может стать известен окружающим, а значит, служить причиной для дискриминации [25] : увольнения с работы, развода с супругом, потери близкого человека или друзей, отказа в предоставлении медицинской помощи или других услуг. Часто получение положительного результата теста приводит к сильному стрессу у самого человека. Поэтому решение о тестировании должно приниматься осознанно, без давления и на полностью добровольной основе.

В настоящее время тест доступен в большинстве российских городов. Как правило, тест по желанию пациента можно сделать анонимно и бесплатно. Документы требуются, если пациенту нужна справка с результатом на его имя. Забор крови делают в районных кожно-венерологических диспансерах (КВД), городских СПИД-центрах (организованных во всех городах уровня районного и областного центра) и многочисленных коммерческих лабораториях [26] .

Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан от 22 июля 1993 года № 5487-1 устанавливают [27] , что для любого медицинского вмешательства необходимо информированное добровольное согласие пациента. Это, в частности, означает, что забор крови не может быть на законных основаниях произведён принудительно. Исключение сделано для пациентов, чьё состояние здоровья не позволяет им выразить свою волю (в этом случае решение принимает медицинский консилиум), и для подростков младше 15 лет (решение принимают законные представители).

Принудительное тестирование каких бы то ни было групп населения бесперспективно с точки зрения сдерживания эпидемии [ источник не указан 260 дней ] и противоречит соблюдению прав человека. Проведение теста без согласия человека является незаконным в России. Существуют также 4 ситуации, в которых предоставление результатов тестирования на ВИЧ является обязательным (но не насильственным — каждый может просто отказаться от участия [28] :

1. Донорство крови, других биологических жидкостей и органов.
2. При устройстве на работу медицинского работника или другого специалиста в учреждение, которое непосредственно обрабатывает или принимает материалы, заведомо содержащие ВИЧ.
3. Для иностранных граждан — получение виз для проживания на территории России сроком более 3 месяцев.
4. Тестирование лиц, находящихся в местах лишения свободы в случае наличия клинических показаний (и в этом случае обследование может быть проведено только с согласия пациента).

Одним из наиболее достоверных исследований на ВИЧ является ИФА (иммуноферментный анализ). Чтобы выявить наличие вируса иммунодефицита в крови, проводится тестирование на антитела. Стоит ли волноваться, если их не обнаружили? Что означает положительный результат ИФА?

О чем говорят антитела к ВИЧ в крови

Если в организм человека попал болезнетворный вирус, иммунная система начинает вырабатывать антитела к ВИЧ. Когда в исследуемой пробе крови обнаружены такие белковые соединения, это является тревожным сигналом. Велика вероятность, что человек заражен опасным вирусом. Обнаруженный антиген ВИЧ р24 говорит о том, что недавно произошло инфицирование вирусом иммунодефицита. Антиген – органическое вещество. Количество его в крови уменьшается по мере продуцирования организмом антител. Количество антител на единицу крови позволяет прогнозировать развитие болезни.

Еще одна важная характеристика – вирусная нагрузка (концентрация вирусных клеток в 1 мл плазмы крови). Чем больше величина данного показателя, тем сильнее угнетена иммунная система. Она не в силах препятствовать размножению вируса.

Через какое время появляются антитела к ВИЧ

Иммуноферментный анализ на ВИЧ проводят через 3 – 4 недели после возможного заражения. Делать это раньше бессмысленно, ведь антитела еще не успели сформироваться, либо их слишком мало. Если заражение произошло, а антител ВИЧ в крови не обнаружено, то подобный тест называют ложноотрицательным. Чтобы поставить окончательный диагноз, первичной положительной реакции ВИЧ-тестов недостаточно. Гарантом достоверности исследований является перепроверка. Новую диагностику выполняют спустя 3 месяца и через полгода. Если все результаты положительны, назначают дополнительные тестирования.

Указанные сроки – среднестатистические. В каждом отдельном случае сроки отличаются. Если порция зараженного биоматериала, попавшего во внутренние среды организма, была велика, защитные белки – антитела – могут сформироваться уже через неделю. Такое возможно при переливании инфицированной крови. В 0,5% случаев обнаружить ВИЧ удается только через год. Подобное бывает, если количество вирусных клеток очень мало.

Сроки, когда антитела появляются в организме зараженного человека:

• в 90 – 95% случаев – через 3 месяца после предполагаемого заражения;
• в 5 – 9% случаев– через 6 мес;
• в 0,5 – 1% случаев – в более поздние сроки.

Нормы показателей на наличие антител

Антитела, или иммуноглобулины, образуются при попадании в организм чужеродных вирусов и бактерий, а также любых вредоносных органических соединений. Для каждой вирусной клетки существует свой антагонист. Образуются уникальные пары: инородная клетка + иммуноглобулин. Выявив антитела, присутствующие в организме, медики получают информацию о вирусах, которые спровоцировали их возникновение. Иммуноглобулины делят на 5 групп:

1. IgA – отвечают за иммунный отпор при простудах, кожных воспалениях, общей интоксикации;
2. IgE – призваны бороться с паразитами;
3. IgM – стражи организма. Они «атакуют» вирусные клетки, как только они проникают в кровь;
4. IgD – пока направление их деятельности неизвестно. Таких иммуноглобулинов не более 1%;
5. IgG – обеспечивает сопротивление при длительном течении болезни, отвечает за защиту плода в утробе матери и является основным барьером от вирусов у новорожденных. Рост уровня IgG в крови может свидетельствовать о развитии ВИЧ.

Нормальные показатели IgG (гигамоль на литр)

Дети от 7,4 до 13,6 г/л

Взрослые от 7,8 до 18,5 г/л

Чтобы выявить антитела к ВИЧ, проводят количественный анализ. Отрицательный результат – норма для здорового человека. Положительный тест указывает на проникновение в организм вирусных частиц, против которых синтезируются защитные иммуноглобулины.

Если в графе «антитела» стоит «+», подводить итог еще рано, назначают дополнительные исследования. Не всегда причиной положительной реакции бывает заражение ВИЧ. Часто проявляются другие причины отклонения от нормы. Причины ложноположительных реакций:

• в первые 18 месяцев жизни в крови ребенка содержатся иммуноглобулины, полученные им от матери во время беременности;
• течение в организме аутоиммунных процессов;
• наличие ревматоидного фактора;
• прием лекарственных препаратов.

Количественный анализ помогает определить стадию болезни. Если число иммуноглобулинов незначительно, заболевание только начинает развиваться. Прогноз в подобном случае благоприятный. Высокая концентрация защитных белков может означать, что ВИЧ достиг завершающей стадии – СПИДа.

Выделяют ВИЧ 1 и 2 типов. Каждый из них вызывает формирование определенных антител. Определить тип антител помогает качественный анализ. В бланке такого тестирования указаны цифры 1 и 2, и данные заполнены напротив каждой из них.

Как выявляют антитела к ВИЧ

Из порции венозной крови выделяют сыворотку. Ее наносят на твердую основу и соединяют с вирусными клетками. Затем поверхность обрабатывают специальными ферментами. В крови, где изначально присутствовали вирусы иммунодефицита, после промывки вырабатываются антитела.

Человек, которому предстоит сдать кровь на антитела, за 2 дня до анализа должен отказаться от жирной и острой пищи, не пить алкогольных напитков. За 2 недели рекомендуется прекратить прием противовирусных лекарств. Любые препараты следует употреблять только при крайней необходимости. Накануне теста рекомендуется соблюдать психологический и физический покой. Анализ проводят натощак в утренние часы. Исследования на наличие антител признаны наиболее достоверными в диагностике ВИЧ-инфекции. Погрешность составляет не более 2%.

Показания к проведению ИФА, включая клинические признаки ВИЧ:

• постоянные рецидивы инфекционных заболеваний;
• длительная лихорадка;
• высокая вероятность заражения (незащищенные половые контакты или переливание крови от ВИЧ-позитивного человека);
• госпитализация в стационар;
• сдача донорской крови;
• планирование беременности и ее течение;
• травма иглой или другим острым предметом, инфицированным биологическим материалом;
• перед хирургическим вмешательством.

Признаки ВИЧ могут появиться не сразу. В некоторых случаях болезнь не дает о себе знать очень долго (до 10 лет). Данный факт препятствует своевременной диагностике и лечению. Чтобы вовремя распознать вирус иммунодефицита человека, следует сдать анализы при малейшем подозрении. В случае подтверждения диагноза выявляются все половые партнеры инфицированных. Им следует сдать анализы и определить свой ВИЧ-статус. Медицинский персонал, работающий с больными ВИЧ, должен проходить плановые проверки.

Михаил Макматов-Рысь СПИД.ЦЕНТР

Чем отличается ИФА от ПЦР, и что эти аббревиатуры вообще значат? Через сколько тест точно покажет, есть у меня ВИЧ или нет? Где можно сдать? Ответы на эти и другие вопросы в разборе СПИД.ЦЕНТРа.

У каждого есть ВИЧ-статус, только у одних он положительный, а у других — отрицательный. Однако знать его необходимо, особенно в российских реалиях, когда в стране эпидемия, и уже более одного процента населения живет с вирусом.

Для диагностики вируса иммунодефицита человека существует несколько видов тестов, причем их классификация сложна лишь на первый взгляд, на самом деле она весьма логична. Главное — помнить, что, несмотря на высокую точность анализов, ни один тест не найдет вирус сразу после заражения.

Скрининговые (поисковые) тесты

Они помогают заподозрить инфекцию, но их результаты надо подтверждать другими анализами. Для скрининга используют тесты либо на антитела, либо на антигены/антитела.

ИФА (иммуноферментый анализ).

Этот метод служит не для обнаружения самого вируса, а антител, которые наша иммунная система вырабатывает для борьбы с ним.

Делают его следующим образом: на очищенные части вируса (антигены), зафиксированные в специальной лунке, наносят кровь. Если в ней есть антитела, то образуются иммунные комплексы антиген/антитело, которые вступают в реакцию с красителем, приводя к изменению цвета. Это оценивается качественно (есть/нет реакции) и/или количественно при помощи дополнительной аппаратуры.

Существует несколько поколений ИФА:

• В первом поколении тестов использовался сам вирус, обработанный ультразвуком, при этом определялись антитела только ВИЧ-1. Анализ обладал невысокой чувствительностью и специфичностью.
• ИФА второго поколения научили определять антитела как к ВИЧ-1, так и к ВИЧ-2. Материалом служили синтезированные белки, аналогичные настоящим антигенам вируса. Впрочем, тесты первого и второго поколения давно не используются.
• Следом появились тесты третьего поколения, которые позволяют диагностировать длительно текущую (хроническую) ВИЧ-инфекцию с чувствительностью и специфичностью около 100 %. Однако при острой ВИЧ-инфекции (когда антител мало или совсем нет) их точность считается недостаточной.

Современный ИФА позволяет обнаружить антитела, появляющиеся в крови с 30-го (цифры согласно клиническим рекомендациям Минздрава) дня инфицирования (по данным Центра контроля и профилактики заболеваний в США CDC — c 23 по 90 день).

по теме

Лечение

Как устроены ВИЧ и АРВТ? Объясняем на пальцах

За счет своей простоты и дешевизны этот метод используется чаще всего, в том числе на его основе работают экспресс-тесты.

Если такой тест оказался положительным, результат перепроверяется на тест-системе другого производителя, и в случае положительного результата применяется иммуноблот (смотри ниже).

Самое последнее поколение ИФА — четвертое. И оно уже позволяет проводить комбинированный анализ, одновременно проверяя: есть ли в крови белковые «обломки» ВИЧ (антигены), а также антитела.

Примечательно, что антиген р24 появляется в крови уже через 15 дней (по данным CDC — с 18 по 45 день) после инфицирования ВИЧ, поэтому такой вид анализа позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию раньше.

Так, эксперты из CDC считают комбинированные тесты наиболее предпочтительными для массового клинического использования. А российский Минздрав рекомендует его применять в качестве скринингового в большинстве лабораторий страны. Однако после получения положительного результата его также нужно перепроверять иммуноблоттингом.

Существуют два вида вируса ВИЧ — 1 и 2. В мире наиболее распространен ВИЧ-1. Разновидности вируса различаются по генетическому материалу, по-разному взаимодействуют с иммунитетом и отвечают на лечение.

Подтверждающие тесты

Как следует из названия, они позволяют наверняка убедиться в наличии или отсутствии вируса иммунодефицита у человека. Их минус в сложности и дороговизне.

Иммуноблоттинг помогает проверить результаты скрининговых анализов и уточнить, каким видом вируса инфицирован человек: ВИЧ-1, ВИЧ-2 или обоими. Этот метод обладает высокой точностью, чувствительностью, но дорог и сложен в исполнении. Он является комбинацией ИФА и электрофореза, что позволяет определить антитела к специфическим антигенам ВИЧ-1 (gp160, gp120, gp41). Белки под действием электрического поля располагаются в виде полосок на нитроцеллюлозной мембране.

При положительной реакции антиген/антитело на полосках становится видно потемнение.

ПЦР (полимеразная цепная реакция). Тест способен находить генетический материал ВИЧ (ДНК/РНК), то есть проверяет, есть ли непосредственно вирус в крови. Нуклеиновые кислоты могут обнаруживаться уже на 7-й день после инфицирования (по данным CDC — c 10 по 33 день).

При этом методе в пробирке с помощью различных ферментов многократно дублируется участок ДНК или РНК вируса до таких объемов, что его можно увидеть глазом в виде полосок. Кроме того, ПЦР бывает качественным и количественным. В последнем случае можно отслеживать вирусную нагрузку (концентрацию вируса в крови и других биологических жидкостях) у людей с ВИЧ, оценивая эффект терапии.

А я могу сдать сразу иммуноблот или ПЦР, чтобы узнать свой ВИЧ-статус?

Иммуноблот используют специальные лаборатории центров по борьбе со СПИДом. Пробы крови направляются туда для перепроверки уже положительных первичных скрининговых анализов. Сразу сдать его не получится, даже в платных клиниках.

ПЦР, наоборот, можно сдать в любой момент, но только обратившись в коммерческую лабораторию. В СПИД-центрах его делают также для перепроверки ранее положительного теста. Да, ПЦР позволяет максимально быстро (в течение 7—10 дней после инфицирования) обнаружить ВИЧ, но и у него есть недостатки:

• высокая стоимость;
• может обнаружить только ВИЧ-1;
• в редких случаях выявление низких уровней РНК ВИЧ (например,

Кроме того, прием PrEP и PEP могут влиять на точность анализов, так как антиретровирусные препараты уменьшают количество вируса в крови и антител к нему.

В случае с PEP после окончания курса рекомендуется посоветоваться с врачом и подобрать оптимальные сроки проведения анализов. Первый тест обычно проводят через 4—6 недель после контакта с ВИЧ, затем через 3 месяца, при необходимости — через 6 месяцев.

Считается, что крайне важно сдать анализ на ВИЧ перед началом приема PrEP и затем проверяться каждые 3 месяца, уже находясь на PrEP.

На результаты теста не влияют прием пищи и алкоголя или курение. Специальной подготовки перед сдачей анализов на ВИЧ не требуется.

А что с экспресс-тестами?

Они позволяют провериться на ВИЧ, не посещая лабораторию или поликлинику. По сути, это тесты ИФА третьего поколения, которые определяют антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в слюне, моче или крови.

Их рекомендуют делать через три месяца после возможного риска инфицирования (чтобы избежать попадания в «окно»). Но считаются достоверными они с 30-го дня предполагаемого заражения (период появления антител).

На рисунке показано, как быстро в крови появляются сам вирус (его генетический материал РНК) антитела и антигены, а также какие системы тестирования можно применить.

Точность большинства экспресс-тестов при хронической (длительно текущей) ВИЧ-инфекции достаточно высока (> 99 % чувствительности и специфичности), но все равно чуть ниже лабораторных анализов.

Сегодня среди них наиболее популярны тесты слюны (или околодесневой жидкости) и крови. Их можно либо купить самому, либо получить бесплатно в ВИЧ-сервисных организациях.

Если вы сделали экспресс-тест и он оказался положительным, необходимо его перепроверить более точным методом.

Где я могу сделать тест на ВИЧ анонимно и бесплатно?

Можно пойти в местный СПИД-центр, кабинеты анонимного консультирования или в некоммерческие организации (например, фонд «СПИД.ЦЕНТР»). Анализ на ВИЧ бесплатный и анонимный, прикрепление к поликлинике и регистрация не требуются. После сдачи теста выдается идентификационный номер, по которому можно будет узнать результат.