Что дает игх

ИГХ исследования – что это такое

ИГХ представляет собой методику, используемую в патологической анатомии для диагностики раковых и доброкачественных опухолей. Его назначают, когда установить точный диагноз стандартным гистологическим способом невозможно или необходима детализация клинически значимых параметров новообразований на молекулярном уровне.

Очень часто гистологии бывает недостаточно. В большинстве случаев причиной этому является крайне нетипичная структура патологического образования, что существенно затрудняет постановку точного диагноза. В частности, при лимфоме и лейкозе ИГХ делают практически всегда.

Нужно отметить, что всего насчитывается около 70 разновидностей лейкозов и лимфом. Верифицировать некоторые их них удается лишь путем нескольких исследований – гистологического, иммуногистохимического и молекулярно-генетического.

Еще один диагноз – «мелкокруглоклеточная опухоль» – может означать 13 злокачественных образований, имеющих разное течение и прогноз. Кроме того, каждое из них требует разработки особой схемы химио- и радиотерапии. Дифференцировать такие опухоли помогает единственный метод – иммуногистохимия.

Суть методики

При развитии любого опухолевого процесса формируются чужеродные организму белки – антигены, в противовес которым иммунная система человека вырабатывает антитела – иммуноглобулины. Они прикрепляются к антигенам и связываются с эпитопами – основными частями антигенных макромолекул. Антитела выполняют сразу две функции: связывающую и эффекторную. Проще говоря, они напрямую мешают антигенам наносить вред и одновременно активируют комплемент, запуская ответную реакцию иммунитета.

Роль антигенов в данном случае принадлежит атипичным опухолевым клеткам. Перед тем как провести иммуногистохимическое исследование, срезы биометариала маркируются специфическими антителами к ним. В целях дальнейшей визуализации эти антитела окрашиваются ферментами. Далее, используя высокоточную оптику, наблюдают за поведением испытуемых клеток.

Если белковые соединения, помеченные как антитела, связываются с опухолевыми клетками, будет видно свечение – флюоресценцию, свидетельствующую о наличии искомых веществ. Так выявляют, например, рецепторы к гормонам и онкомаркеры. При подозрении на рак молочной железы таким образом обнаруживаются рецепторы к эстрогену и прогестерону.

Кому показано

Основным показанием к назначению иммуногистохимии являются злокачественные новообразования. В онкологии данный метод применяется для поиска метастазов и патологических микроорганизмов, определения вида и локализации опухоли, а также с целью оценки активности патологического процесса. С помощью ИГХ можно установить окончательный или, реже, промежуточный диагноз при раке кожи (меланоме), саркоме, лимфогранулематозе, лимфолейкозе и лейкозе, типировать степень злокачественности процесса. Последнее крайне важно при нейроэндокринных образованиях, которые еще называют «скрытыми убийцами» из-за того, что их очень трудно распознать на ранних стадиях.

В отдельных случаях иммуногистохимический анализ позволяет установить источник метастазов, когда локализация первичного очага неизвестна, а также провести дифференциальную диагностику при нескольких новообразованиях разного происхождения.

ИГХ может назначаться при бесплодии, хронических патологиях эндометрия, матки и яичников, привычных выкидышах. Ее целесообразно делать и в том случае, если беременность не наступает после нескольких процедур ЭКО.

Иммуногистохимия поможет обнаружить наличие клеток, препятствующих зачатию, и определить дальнейшую тактику лечения бесплодия.

Методом ИГХ оценивают и лекарственную чувствительность путем выявления:

• рецепторов половых гормонов – эстрогена, прогестерона и андрогенов. Необходимо при поражении женской репродуктивной системы;
• фактора роста опухоли Her2/neu. Биомаркер и терапевтическая мишень агрессивных типов рака груди;
• соматостатиновых рецепторов 2а и 5 типа, важных при карциноидах;
• мембранного белка иммуноглобулинов PD-L1, гена ALK и рецептора тирозинкиназы ROS. Данные показатели исследуются преимущественно при немелкоклеточном раке легких;
• микросателлитной нестабильности;
• индекса пролиферативной активности.

Трудно переоценить важность микросателлитной нестабильности (MSI), которая существенно расширяет прогностические и лечебные возможности у пациентов со злокачественными поражениями ЖКТ. Новообразования с низкой MSI медленнее растут и реже дают метастазы. Поэтому своевременное выявление MSI позволяет избежать назначения агрессивной, но заведомо неэффективной терапии.

ИГХ исследования: что это такое и как проводятся

Для выполнения ИГХ необходим биоматериал, забор которого осуществляется в основном путем взятия биопсии. Несколько реже его получают в ходе эндоскопической или классической открытой операции. Способ изъятия пораженной ткани зависит от типа и локализации рака. При этом следует учесть, что брать материал на анализ следует до начала терапии. В противном случае возможно искажение результатов исследования.

Этапы проведения анализа:

1. Полученный биоматериал фиксируют, обрабатывая в формалине, и отправляют в лабораторию.
2. Затем его обезжиривают и подвергают повторной фиксации, после чего заливают парафином.
3. Далее производится микротомирование – с готовых парафиновых блоков делаются тонкие срезы, которые помещаются на специальные стекла. Толщина среза составляет не больше 1 мкм.

Когда ткани лежат на стеклах, их обрабатывают раствором антител. Количество их видов ограничено несколькими десятками. Исследование реакций с применением до 5 разных антител проводится на малой панели. При более масштабном эксперименте нужна большая панель.

В ходе ИГХ рак любого органа проявляется эффектом свечения – флюоресценции, – благодаря чему выявляются злокачественные клетки, определяются рецепторы гормонов или другие заданные параметры.

Расшифровка

Изучением срезов биоматериала занимаются врачи-патологоанатомы. Они же первыми составляют прогноз, исходя из выявленного типа и объема онкогенных клеток. При расшифровке результатов особое внимание обращают на показатель К-67 – специфический белок, антиген ракового процесса. Он вырабатывается только при активном делении клеток, а в состоянии покоя не продуцируется.

К-67 – это именно тот онкомаркер, что показывает степень озлокачествления процесса. Если его уровень в процентном содержании составляет 85% и выше, то заболевание прогрессирует стремительно и с высокой вероятностью вскоре приведет к смерти.

Благоприятным будет прогноз при К-67=10%. В случае грамотно составленного плана терапии есть все шансы на полное выздоровление, зачастую без риска рецидива. При К=30% констатируют среднюю степень тяжести болезни, что означает достаточно быстрый рост рака. С помощью курсовой химиотерапии его можно замедлить и даже остановить.

Однако К-67 – это не единственный показатель, который указывается в медицинском заключении. Также записываются антитела, к которым выявлены соответствующие антигены, тип и количество последних.

Полученное заключение врач-патологоанатом передает лечащему онкологу, который подбирает лечение. Для оценки его эффективности иммуногистохимию проводят еще раз после завершения терапевтического курса.

Важнейшим пунктом при диагностике раковых заболеваний является иммуногистохимическое исследование. Ежедневно в организм человека проникают микроорганизмы, способные запустить развитие патологического процесса. Защитные силы противостоят этому, образуя антитела. Эта реакция и легла в основу создания ИГХ-исследования.

Суть метода

Данный способ диагностики раковых заболеваний является наиболее современным и достоверным. В процессе развития опухолевого процесса образуются чужеродные организму белки – антигены. В это же время иммунная система вырабатывает антитела, главная цель которых – предотвращение размножения патогенных микроорганизмов.

Задачей иммуногистохимического исследования является своевременное выявление раковых клеток. Для этого биологический материал пациента обрабатывается множеством антител, после чего тщательно изучается под микроскопом. Если данные белковые соединения свяжутся с опухолевыми клетками, будет визуализироваться их свечение. Возникновение эффекта флюоресценции и свидетельствует о наличии в организме раковых клеток.

На сегодняшний день в распоряжении специалистов, осуществляющих ИГХ-исследование, имеются практически все антитела к различным видам опухолей, что служит залогом получения достоверных результатов.

Возможности

Современный вид диагностики позволяет определить:

• распространение опухолевого процесса;
• скорость роста злокачественных новообразований;
• вид опухоли;
• источник метастазов;
• уровень злокачественности.

Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования может оцениваться степень эффективности лечения раковых заболеваний.

Показания и противопоказания

С помощью данного способа существует возможность изучения любых тканей человеческого организма. Главным основанием для назначения иммуногистохимического исследования является подозрение о наличии злокачественного образования.

В этом случае метод используется для:

• определения вида опухоли и области её локализации;
• обнаружения метастазов;
• оценки активности опухолевого процесса;
• выявления патологических микроорганизмов.

Также анализ эффективен при проблемах с зачатием.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия показано при:

• бесплодии;
• заболеваниях матки;
• наличии патологий в органах репродуктивной системы;
• невынашивании беременности;
• хронических заболеваниях эндометрия.

Кроме того, ИГХ-исследование назначается пациенткам, у которых не наступает беременность даже после нескольких попыток экстракорпорального оплодотворения. Метод позволяет определить, имеются ли в организме клетки, снижающие вероятность зачатия.

Противопоказаний к ИГХ-исследованию не существует. Единственным фактором, из-за которого невозможно провести анализ, является непреодолимая сложность при заборе биоматериала пациента.

Как проводится

В первую очередь методом биопсии получают образец ткани больного. Реже забор материала осуществляется в процессе эндоскопического обследования или хирургического вмешательства. Способ получения образца зависит от вида опухоли и её локализации.

Важным нюансом является то, что забор материала при первичном обследовании должен осуществляться до начала лечения. В противном случае результаты исследования могут быть искажены.

После забора биоматериала его помещают в формалин и отправляют в лабораторию, где он подвергается следующей обработке:

1. Образец ткани обезжиривается и заливается парафином. В данном виде биологический материал может храниться очень долго, за счёт чего ИГХ-исследование может быть проведено повторно.
2. С образца собирают несколько тонких срезов и перемещают их на специальные стёкла.
3. На них биоматериал окрашивается растворами различных антител. На данном этапе может применяться как малая панель, так и большая. В первом случае изучаются реакции после использования 5 видов антител, во втором – до нескольких десятков.
4. В процессе иммуногистохимического исследования при раке любого органа появляется эффект флюоресценции, что даёт возможность специалисту определить вид злокачественных клеток.

Интерпретация результатов

Как правило, заключение готово через 7–15 дней. Срок зависит от вида используемой панели (малой или большой). Расширенный способ занимает больше времени.

Изучением срезов биоматериала занимается патологоанатом, имеющий знания и навыки (подтверждённые официальным документом), необходимые для проведения анализа.

При интерпретации результатов особое внимание обращается на показатель Ki-67. Именно он предоставляет информацию о степени злокачественности процесса. Например, если результат показателя после проведения иммуногистохимического исследования при раке молочной железы составляет не более 15%, считается, что прогноз более чем благоприятный. Уровень в 30% свидетельствует об активности опухолевого процесса, т.е. о быстрой скорости его развития. Как правило, она останавливается после курса химиотерапии.

По некоторым статистическим данным, если Ki-67 составляет менее 10%, итог заболевания будет благоприятным (в 95% случаев). Отметка в 90% и выше означает почти 100%-ный летальный исход.

Кроме показателя злокачественности, в заключении указываются:

• антитела, к которым выявлено сходство (тропность);
• вид раковых клеток, их количественное значение.

Важно понимать, что точный диагноз ставится после получения и изучения информации, собранной посредством всех проведённых диагностических процедур. Несмотря на то, что ИГХ-анализ считается наиболее информативным методом по сравнению с гистологией, иногда необходимо использовать оба способа. Расшифровкой иммуногистохимического исследования занимается исключительно онколог.

В заключение

В современной медицине особое внимание уделяется диагностике раковых заболеваний. Наиболее современным и информативным методом считается иммуногистохимическое исследование. С его помощью выявляется не только наличие раковых клеток, но и определяется их вид и скорость развития злокачественного процесса. Кроме того, на основании результатов производится оценка эффективности назначенного лечения.

Иммуногистохимия – это специальный анализ для определения ракового заболевания. С его помощью находят антигены, выделяемые определённым видом раковых клеток. Вдобавок с помощью иммуногистохимии прослеживается реакция антигенов на лечение. Анализ составляет основу диагностики и терапии в современной онкологии.

Как работает метод

В названии метода соединились три отрасли – иммунология, гистология и химия. Для анализа используют химические вещества. Реактивы насыщены антителами, находящими раковые антигены. Антитело – это белок, его структура притягивает антиген. Белок окрашивают ферментами, красителями, которые проявляются при положительной реакции.

Теоретические основы иммуногистохимии заложены в 40-е годы 20-го века. С помощью флуоресценции находили антигены в замороженных клетках. Затем стали использовать окрашенные ферментами антитела. Установили соответствия цветовой реакции и типа раковых клеток. Также определили гормоны и их рецепторы.

Практическое применение методов ИГХ:

• Определение типа клеток;
• Изучение секреторных внутриклеточных процессов и особенностей клеточного синтеза;
• Определение гормонов и гормональных рецепторов.

• Прямой метод – маркированные антитела соединяются с искомыми антигенами.
• Непрямой, «антиген-антитело» – неотмеченные антитела находят антигены, потом их соединения обнаруживают вторичные отмеченные антитела.

Цвет реакции показывает статус опухоли.

Цель метода

Иммуногистохимическое исследование отвечает на три вопроса.

Что это такое

Специфический анализ помогает выяснить строение раковой клетки и идентифицировать по гистологическим признакам, к какому классу относится новообразование.

Где оно находится

Если точная локализация опухоли неизвестна, с помощью иммуногистохимии находят расположение по метастазу.

Как это лечить

С помощью анализа видна реакция антигенов на вещества препаратов химиотерапии. Так удаётся оценить, окажется ли действенным лечение указанным способом. Установить, к каким препаратам рак устойчив, можно прежде, чем химия попадет в организм человека. Таким образом, пациента избавляют от лишней интоксикации, а сразу назначают лекарство, о действенности которого заведомо известно. Если рак устойчив к химиотерапии, предстоит выбрать другой метод лечения.

Это помогает в лечении эстрогенозависимых опухолей при раке молочной железы.

Сложная структура железистых клеток включает признаки новообразований различной степени агрессивности. Эти опухоли бывают устойчивыми к химиотерапии и гормонам. Насколько агрессивно развивается опухоль, возможно установить по маркеру пролиферации в иммуногистохимическом тесте.

Как проходит процедура

На иммуногистохимический анализ попадает образец ткани, взятый с помощью биопсии. Это способ забора биоматериала с помощью тонкой иглы. Её вводят в тело пациента и шприц-системой втягивают ткань опухоли. Образец проходит подготовку:

• Фиксация с помощью парафина.
• Изготовление срезов.
• Распределение срезов по стеклам.
• Обработка образцов антителами и красителями.

Перед исследованием биоматериал хранится в формалине. Это позволяет использовать единственный образец долгое время, чтобы не травмировать пациента. Биопсия бывает болезненна, если опухоли расположены в труднодоступных местах. Злокачественные образования в головном мозге по возможности удаляют оперативно, на анализ попадает непосредственно опухоль. Важно сохранить материал, так как опухоли бывают размером до 1 см. По результатам теста строится программа лечения. Впрочем, в этом случае иммуногистохимия обладает преимуществом.

Положительные и отрицательные стороны

• Требуется минимум биоматериала и реактивов;
• Определяет рак на ранней стадии;
• Быстрый результат;
• Точность и достоверность.

Дополнительное преимущество – в возможности трехмерного моделирования. Ответная реакция на антитела видна через три часа. Окончательное заключение дается через 7-10 дней. По истечении этого времени будет точно установлен тип рака и стадия заболевания, а также его первичный очаг. Изменение цвета маркеров обычно не имеет разночтений при постановке диагноза. На итоговом бланке прописывают расшифровку результатов.

Достоверность зависит от метода окрашивания образца реактивами. Это делается автоматически и вручную. При ручном методе не исключён человеческий фактор, ошибки лаборантов. Лечащий врач подскажет, в какую лабораторию обратиться. Пациент может самостоятельно поинтересоваться, как проводится анализ в конкретном учреждении. Для достоверности результата он может проводиться повторно или в двух лабораториях.

Погрешность в результате возникает по вине пациента. Перед биопсией следует отказаться от гормональных препаратов и других лекарств, от физических нагрузок, придерживаться диеты. Внешние факторы влияют на результаты.

Применение метода в диагностике

Показания к анализу:

• Патологии репродуктивной системы, бесплодие;
• Активный опухолевый рост любой локализации.

Противопоказаний к анализу нет. Порой невозможно получить биоматериал для исследования из-за расположения опухоли.

Иммуногистохимия эндометрия – важное исследование для нахождения причин бесплодия. Его цель – найти антиспермальные клетки, препятствующие оплодотворению. Причиной бесплодия становится нечувствительность эндометрия к гормонам во время овуляции. При этом показатели гормонального фона в норме, антиспермальных тел нет. Иммуногистохимическая диагностика выявляет, что проблема в рецепторах эндометрия.

Трудно поддаются диагностике тимомы. Их деление на злокачественные и доброкачественные условно. Всё зависит от конкретного случая. Статус опухоли вилочковой железы, тимуса показывает исследование на антитела.

ИГХ при раке прямой кишки применяется, чтобы установить эпителиальный или эндокринный характер опухоли, наследственный фактор и прогноз. Методика определяет первичное ли заболевание и метастазы.

Расшифровка результатов основана на показателе степени злокачественности. Чем он выше, тем менее благоприятный прогноз. Патология – 85% содержания маркера, означает последнюю стадию заболевания с метастазами. Менее 10% – норма, благополучный исход лечения.

Другие маркерные методы

Онкологический диагноз всё же редко ставят по результатам единственного исследования.

Гистологический

Второй информативный анализ – гистология. Метод отличается от иммуногистохимии тем, что даёт представление только о клеточном строении. Гистологическим способом выделяют в одном материале несколько различных структур, к примеру, аденокарциномы. Злокачественное образование формируется из железистой ткани, которое выделяет жидкость. Исходя из типа жидкости, выделяют серозную и слизисто-секреторную. Клетки аденокарцином располагаются фолликулярно или папиллярно. Опухоль бывает твердой или с включениями цист, и уже классифицируется как цистаденокарцинома. Об этих характеристиках узнают по результатам гистологического исследования и корректируют лечение под конкретный тип опухоли.

Технология такая же, как при иммуногистохимии. Берут материал с помощью биопсии, покрывают парафином и разрезают образец на тонкие пластины. Готовые препараты также окрашивают, после чего патоморфолог изучает их под микроскопом.

Недостатки гистологического исследования – длительные сроки ожидания результата планового анализа, 10-14 дней. Срочный анализ делают за 30 мин.

Метод МГМ

Ещё один анализ, в основе которого лежит реакция на маркеры – молекулярно-генетический. Помогает установить отклонения в ДНК злокачественной опухоли, влияющие на её метастатическую и инвазивную активность, а также наличие наследственной предрасположенности или спорадической, спонтанной природы образования.

Гистология и иммуногистохимия – два основных метода постановки диагноза при раке, подтверждающие друг друга. Разница в результатах редка, так как иммуногистохимия включает исследование клеточного строения.

Часто после гистологического исследования лимфоузла пациента дополнительно направляют на иммуногистохимию. Под микроскопом материал изучает эксперт, который может что-то упустить. Либо структуру сложно идентифицировать. Метод ИГХ – помощь в спорной ситуации.

Лаборатории и стоимость

В России есть лаборатории, где можно сделать тест на иммуногистохимию.

Лаборатория компании «ЮНИМ», Инновационный центр Сколково, Москва – 28300 р. любой сложности, 19000 при раке молочной железы, срок 3 дня.

Лаборатория «Мелайн-Сервис», Москва:

• 6560 р. анализ на 1 антитело;
• 15980 р. анализ мягкотканных опухолей 6-10 антител;
• 27350 р. сложный анализ на 11-14 антител;
• 12620 р. – стандартное исследование молочной, предстательной железы, определение статуса эндометрия, 2-5 антител.

Центр молекулярной диагностики в Москве и с филиалами в регионах РФ:

• 5170 р. – 1 антитело;
• 12500 р. – 5 антител;
• 24000 р. – 10 антител.

Стоимость зависит от сложности исследования и вида рака.