Ki в онкологии

Иммуногистохимическое исследование в онкологии – это разновидность исследования ткани с помощью специальных реактивов по принципу антиген-антитело.

При иммуногистохимическом исследовании используются реактивы, которые содержат антитела, отмеченные специальными веществами.

Антитело – это белок, который связывается в тканях с определенными молекулами – антигенами, после чего возникает реакция. Если же таких молекул нет, то и реакции не будет.

По этому признаку можно судить, присутствует в ткани интересная нам молекула или нет. Это похоже на то, если нанести на белый стол бесцветный клей. Невооруженным глазом на белом фоне он практически незаметен, но стоит насыпать на стол мелкого песка, как клей становится виден за счет прилипших песчинок.

По правилам иммуногистохимическое исследование при раке всегда проводится в специализированной лаборатории. Для его проведения необходима опухолевая ткань, полученная в результате биопсии или операции.

Иммуногистохимическое исследование проводится для определения наличия в опухолевых клетках различных точек приложения, например, наличие рецепторов эстрогенов (ER) и прогестеронов (PR). Также иммуногистохимия выполняется для определения показателя Ki-67 (индекс пролиферативной активности опухолевых клеток), гиперэкспрессии белка Her2neu, VEGF (сосудистый фактор роста), р53.

Иммуногистохимическое исследование при раке выполняется для того, чтобы понять, какими препаратами можно лечить злокачественную опухоль, и к каким видам препаратов она чувствительна.

Самый распространённый анализ, определяемый при иммуногистохимическом исследовании, это наличие рецепторной чувствительности к гормонам у опухоли.

1. ER / PR (Эстрогеновые и прогестероновые рецепторы, ER- еstrogen receptor, PR-progesterone receptor)

ER и PR – протеиновые рецепторы на поверхности опухолевых клеток.

В организме человека постоянно вырабатываются гормоны – эстроген и прогестерон. Эти гормоны воздействуют на ER и PR рецепторы, что приводит к стимуляции роста опухолевых клеток.

Определение Эстрогеновых и Прогетестероновых рецепторов является одним из важнейших моментов, определяющих чувствительность опухоли к терапии гормональными препаратами.

Чаще всего наличие рецепторов ER/PR определяют при раке молочной железы. Их наличие дает возможность, помимо стандартных методов лечения, применить гормональную терапию.

При гормон позитивном раке молочной железы, назначаются препараты: Тамосксифен, Экземестан (Аромазин), Летрозол (Фемара), Анастразол (Аримидекс), Гексэстрол (Синестрол) и другие.Также, считается, что гормонально-зависимый рак молочной железы отличается спокойным течением и редким метастазированием.

Чувствительность опухолевых клеток к гормональной терапии выражается в баллах от до 10. Опухоль считается гормонозависимой, начиная с 2-х баллов. и требует добавления к лечению гормональной терапии.

2. Her2Neu (от англ. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2)

Her2Neu – это рецептор эпидермального фактора роста раковой клетки. Это – ген, который воздействует на мембранные рецепторы клетки, и стимулирует её к усиленному делению.

В некоторых опухолях (чаще всего рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка) присутствует гиперэкспрессия (повышенная активность) Her2Neu, что вызывает быстрое деление опухолевой клетки и её повышенную активность.

Также снижается эффективность химиотерапии, лучевой терапии, гормональной терапии. Из-за этого опухоли с Her2neu позитивным статусом отличаются агрессивным течением.

Существует две методики определения наличия у опухоли гена Her2neu:

Результаты иммуногистохимического исследования выражаются в баллах:

• 0-1 означает, что опухоль без гиперэкспрессии Her2neu.
• 3 означает, что опухоль с гиперэкспрессией Her2neu.

2. Метод FISH (Флуоресцентная гибридизация in situ)

В отличие от иммуногистохимического исследования, при котором определяются белки, при методе FISH определяется наличие генов, кодирующих протеины Her2neu. В зависимости от их наличия, определяется гиперэкспрессия Her2neu.

Определение гиперэкспрессии рецептора Her2neu в опухоли молочной железы является очень важным для дальнейшего назначения лечения.

В современной онкологии гиперэкспрессию Her2neu определяют, чтобы понять, необходимо ли добавление к лечению ингибиторов Her2neu. Для лечения опухолей с гиперэкспрессией рецептора Her2Neu активно и успешно используются таргетные препараты Трастузумаб (Герцептин), Пертузумаб (Перьета), Трастузумаб-эмтанзин (Кадсила), Бейодайм (Трастузумаб+Пертузумаб). Эти препараты прицельно блокируют рецепторы Her2neu, тем самым останавливая активный рост опухолевых клеток и повышая их чувствительность к химиопрепаратам. Добавление таргетной терапии к стандартной химиотерапии при лечении Her2neu позитивных опухолей, серьезно увеличивает общую выживаемость и результат противоопухолевого лечения.

3. Ki-67

Ki-67 – это маркер пролиферативной активности опухолевой клетки. Данный параметр оценивается в процентах и показывает, сколько процентов опухолевых клеток активно делятся.

Если Ki-67 меньше 15%, опухоль считается слабоагрессивной, при показателе Ki-67 от 30 до 50% опухоль считается агрессивной, а при показателе Ki-67 выше 50% опухоль является высокоагрессивной.

Также Ki-67 является фактором прогноза течения опухолевого заболевания и ответа опухоли на химиотерапевтическое лечение. Определяется это простым способом: чем ниже показатель Ki-67, тем хуже опухоль реагирует на химиотерапевтическое лечение. И наоборот – чем выше показатель Ki-67, тем лучше опухоль будет отвечать на химиотерапию.

4. Белок p53

Белок p53 – это транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл. В быстро делящихся клетках обнаружено увеличение концентрации белка р53 по сравнению с клетками, делящимися медленно, что обусловлено высоким риском их онкогенности.

Белок p53 предотвращает образование злокачественных опухолей в нашем организме. В норме, антионкоген р53 находится в неактивном состоянии, а при появлении повреждений ДНК в здоровой клетке – активируется.

Функция белка р53 состоит в удалении тех клеток, которые являются потенциально онкогенными. Это называется – индуцированный апоптоз, уничтожение потенциально опасной клетки.

При иммуногистохимическом исследовании, повышенное содержание белка p53 обнаруживается в 50% злокачественных клеток, что позволяет им беспрепятственно делиться и избегать апоптоза (уничтожения).

Количество белка p53, определяют в дополнение к показателю Кi67, для того, чтобы понять насколько агрессивна опухоль и определить дальнейшее течение болезни. Если уровень белка p53 высокий, значит опухоль не агрессивная и не склонна к метастазированию и быстрому росту. Если же, показатель белка p53 низкий, то значит опухоль агрессивна и склонна к быстрому росту в окружающие ткани и метастазированию.

5. VEGF (Фактор роста эндотелия сосудов)

VEGF – это сигнальный белок, вырабатываемый клетками для активного роста новых сосудов в уже существующей сосудистой системе.

Есть несколько видов белка VEGF, и каждый воздействует на определенный рецептор VEGFR (Vascular endothelial growth factor receptor). Для того чтобы активно делиться, опухоли нужно питание, а для этого нужны сосуды, по которым это питание будет поступать. Именно по этой причине в опухолевых клетках содержится повышенное содержание белка VEGF – для того, чтобы в короткие сроки строить сосудистые сети.

Наличие белка VEGF в опухоли говорит о возможности применения таргетной терапии такими препаратами, как Бевацизумаб (Авастин), Рамуцирумаб (Цирамза), Афлиберцепт (Залтрап). Они перестраивают сосудистую сеть опухоли, тем самым лишая её питания.

6. Определение экспрессии белков PD-1, PDL-1 и PDL-2

Иммунотерапия в онкологии появилась сравнительно недавно, но уже успела показать удивительные результаты в лечении опухолей. Механизм иммунотерапии рака заключается в том, что препарат позволяет иммунитету увидеть опухоль и уничтожить её. Ответственные за «видимость» опухоли белки PD-1, PDL-1 и PDL-2 в достаточном количестве присутствуют не во всех опухолях. Именно поэтому одним пациентам иммунотерапия помогает, а другим нет.

Чаще всего определение гиперэкспрессии белка PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2 необходимо при меланоме, немелкоклеточном раке легкого, раке желудка и раке почки.

Для того чтобы отобрать пациентов, которым показана иммунотерапия, проводится определение наличия экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, при помощи флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). При наличии экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, показано применение иммунотерапии препаратами Пембролизумаб (Кейтруда), Ниволумаб (Опдиво), Атезолизумаб (Тецентрик).

В современной онкологии иммуногистохимическое исследование играет очень важную роль, так как при помощи этого исследования онкологи определяют наличие тех или иных факторов в опухоли, которые позволяют грамотно и адекватно составить дальнейшее лечение пациента и говорить о прогнозах заболевания.

Для верного лечения рака молочной железы необходимо провести множество тестов и анализов, среди которых определение индекса Ki-67. Этот маркер чрезвычайно важен, он позволит составить верный план лечения и определить, как развивается опухоль. Что нужно знать об этом маркере? Как проводится тест? Каковы прогнозы?

Значение

Под Ki67 подразумевается антиген раковой опухоли. Его можно увидеть в клетке при ее делении, но если она находится в фазе покоя, то обнаружить этот антиген невозможно. Благодаря этому маркеру можно прогнозировать поведение раковой опухоли. Тест берется с помощью биопсии или оперативным путем, проводится на образце ткани.

Какова роль маркера

Тест на этот вид маркера проводится не только для рака груди, но и для других злокачественных опухолей. Но в большинстве случаев, именно на рак молочной железы приходится основной процент проведённых тестов с Ki-67. Если уровень антигена высокий, то прогнозы неутешительные и опухоль прогрессирует. Если процент Ki-67 большой, то вероятность рецидива увеличивается. Причем независимо от того, как реагирует новообразование на гормональное лечение.

Если после проведенного лечения заболевание снова дает о себе знать и при этом маркер еще выше, то это говорит о том, что нужно комбинировать несколько методов противораковой терапии.

Когда нужно проводить тест

Если онкология агрессивная, то врач назначает тест для того, чтобы убедиться влияет ли уровень антигена на развитие опухоли. Также сдается ряд и других тестов, например на наличие рецептора HER2 — Neu. Данные, полученные со всех тестов дадут основу для составления плана лечения.

Если опухоль растет быстро, меняется, это может служить основанием для проведения теста. Ведь индекс указывает на количество клеток в стадии деления, а чем больше их делится, тем больше становится.

Как делается анализ

Для того чтобы сдать анализ не нужно какой-то специальной подготовки или условий проведения. Берется часть пораженной ткани и окрашивается. Это позволит определить процент клеток, находящихся или готовящихся к делению. Чем больше клеток в стадии деления, тем еще больше их будет.

• Результат окрашивания оценивается с помощью световых микроскопов.
• Процент определяется соотношением окрашенных клеток ко всем остальным, при этом интенсивность окраски не имеет никакого значения.
• Метод на 15% был изучен врачами патологоанатом, также применяются рекомендации международных медицинских учреждений.
• Тест проводится с учетом раздела всей опухоли.

Итоги теста определяются процентом, если он равен 0%, то не одна из клеток рака не находится в стадии деления, а значит опухоль развивается очень медленно. Если индекс равен 100%, то значит, что все клетки в стадии пролиферации (деления) и опухоль прогрессирует быстро. Если меньше 20% — опухоль растет медленно, все что больше 20% — быстрорастущая онкология. Индекс также используется для оценки эффективности лечения, если оно удачное, то уровень понижается.

Пролиферативный индекс и его польза

Ki 67 — маркер, который является хорошим показателем нахождения клетки в стадии деления (пролиферации). Именно поэтому индекс называют пролиферативным. Уровень маркера означает соотношение клеток, находящихся в стадии деления ко всем остальным. Зная уровень индекса можно сделать довольно точный прогноз выживаемости.

Если уровень индекса высок, то есть делящихся клеток много, то такой рак хорошо подается химиотерапии. Это связано с тем, что препараты химиотерапии убивают только те клетки, которые находятся в стадии пролиферации, а значит и эффективность их высока. Зная индекс, медики смогут подобрать наиболее эффективный план лечения злокачественной опухоли груди.

Спорные вопросы

Ki-67 маркер при раке молочной железы имеет две стороны медали. С одной стороны, если индекс высокий, то прогноз неутешительный, но зато химиотерапия здесь будет точно эффективна.

Другой спорный вопрос об этом тесте заключается в том, будет ли он полезен при определении необходимости адъювантной химиотерапии.

Если результат теста плохой

Зная, что высокий уровень маркера означает плохой прогноз, у пациентки может появиться серьезное чувство тревоги за собственное здоровье. Но не стоит отчаиваться, ведь медицина имеет множество методов лечения рака даже на самых последних стадиях. И знать результаты анализов необходимо, пусть даже они неутешительные, это позволит назначить адекватное лечение.

Чтобы не падать духом, стоит искать поддержку в семье, также не лишним будет общение с женщинами, больными раком груди. Общение может быть как живым, так и через интернет, это позволит не оставаться со своей проблемой наедине, также можно получить много полезной информации.

Стоит знать и некоторую статистику выживаемости:

• При индексе меньше 10% выживаемость — 95%.
• Если индекс выше 10% выживаемость – 85%.

Вывод: при уровне антигена, приближающемся к 100%, шансов на выживание очень мало. Однако даже на такой стадии рак подвергается лечению. С помощью показаний маркера врач определит точно, как прогрессирует болезнь и найдет наиболее качественный способ лечения. Помните, надежду нельзя терять никогда. Шанс на исцеление есть всегда!

Рак молочной железы, как известно, является гетерогенным заболеванием. Это означает, что одно и то же проявление болезни может быть обусловлено мутациями в разных генах или разными мутациями внутри одного гена. Существует много подвидов заболевания, которые могут быть определены с помощью генетического тестирования или на основе методов с использованием иммуногистохимических анализов.

В мультигенных тестах пролиферация (разрастание клеток) оказывает существенное влияние на прогнозирование риска рецидива заболевания. В дополнение к определению обычных гистологических параметров оценка пролиферации является одним из важнейших факторов для принятия решения о лечении у больных раком молочной железы.

Широкий диапазон методов доступен для оценки разрастания опухолевых клеток, в частности, вычисление митотических фигур в сегментах окрашенных тканей, анализ проточной цитометрии для определения доли клеток, находящихся в фазе роста клеточного цикла, рассмотрение индекса тимидин-маркирования пролиферирующих клеток ядерных антигенов.

Ki-67 представляет собой ядерный белок, связанный с клеточной пролиферацией. Первоначально он был идентифицирован в начале 1980-х годов при исследовании мышиного моноклонального антитела, направленного против ядерного антигена лимфомы Ходжкина. Наиболее распространенным методом анализа антигена Ki-67 является иммуногистохимическая оценки.

Было выявлено, что ядерный антиген Ki-67 экспрессируется в определенных фазах клеточного цикла. Экспрессия генов — это процесс преобразования информации от гена в конечный продукт — РНК или белок. С помощью иммунологического окрашивания с моноклональными антителами Ki-67 можно оценить долю роста популяции опухолевых клеток и выявить прогноз течения болезни.

Методы выявления

Ki-67 является раковым антигеном, который обнаруживается в растущих, разделяющихся клетках, но отсутствует в фазе покоя клеточного роста. Эта характеристика делает Ki-67 хорошим маркером опухоли. Анализ проводится на образце ткани опухоли, чтобы помочь предсказать прогноз роста опухоли.

Тест Ki-67 не рекомендован как обязательный при проведении гистологического исследования опухоли молочной железы. Но при агрессивных формах рака врач может назначить этот тест, чтобы увидеть влияние Ki-67 на рост опухоли. Анализ делается в комплексе с другими исследованиями. На основании общих результатов всех полученных анализов вырабатывается план лечения.

Положительный анализ Ki-67 дает более высокий риск рецидива и худший уровень выживаемости у пациентов с ранними стадиями рака молочной железы. В повседневной клинической работе Ki-67 широко используется в качестве дополнительного фактора для принятия решений по адъювантной (дополняющей хирургическую и лучевую) стратегии лечения.

Опухоль молочной железы с высокими баллами Ki-67 состоит из клеток, которые быстро делятся и растут. Химиотерапевтические препараты высоко эффективны как раз для клеток-мишеней, которые растут за пределами нормальной скорости. Поэтому опухоли с более высоким уровнем Kи-67 хорошо реагируют на химиотерапию. Информация об уровне Ki-67 поможет врачу более точно определить, какое лечение будет работать лучше в данном конкретном случае.

Подготовка к анализу Ki-67 не требует каких-либо специальных условий проведения. Используются стандартные методы подготовки материала для гистологического исследования тканей молочной железы.

Анализ проводят путем окрашивания, что позволяет измерить процент опухолевых клеток, которые являются положительными для Ki-67. Чем больше положительных клеток, тем быстрее они делятся и образуют новые клетки.

При проведении анализа применяют следующие методы:

• проводится иммуногистохимическое окрашивание злокачественных клеток ядерного антигена Ki-67. Результат оценивается количественным и визуальным способом с помощью световых микроскопов;
• значение онкомаркера считается как процент положительно маркированных злокачественных клеток с использованием анти-человеческого Ki-67 моноклонального антитела MIB1, которое является одним из наиболее часто используемых антител и рассматривается как «золотой стандарт»;
• процентная оценка Ki-67 определяется как процент положительно окрашенных клеток опухоли среди общего количества злокачественных клеток. Результат не зависит от интенсивности окраски;
• точка отсечки Ki-67 на 15% была определена в соответствии с опытом различных патологоанатомов, а также общепринятых национальных и международных медицинских рекомендаций;
• подсчет результата проводится с учетом раздела всей опухоли.

Значение маркера Ki-67 при раке молочной железы

При раке молочной железы результат Ki-67 менее 10% считается низким, 10-20% пограничным и 20% – высоким.

В таблице 1 показаны средние значения Ki-67 в зависимости от стадии заболевания, размера опухоли и других параметров.

Таблица 1 – Средние показатели Ki-67 в зависимости от различных показателей заболевания

Характеристика	Абсолютное среднее значение Ki-67 (± разбежность)
Стадия менопаузы
пременопаузальная	24,1 (± 20,4)
постклимактерическая	19.3 (± 17.3)
Размер опухоли
pT1	17,7 (± 16,3)
pT2	24,1 (± 20,3)
pT3	20,7 (± 15,7)
pT4	20.1 (± 16.6)
Узловой статус
N0	18,9 (± 17,9)
N1	21,6 (± 18,6)
N2	23,4 (± 17,9)
N3	24,4 (± 17,0)
Гистология
Проточная	21,8 (± 18,7)
Дольковая	13,3 (± 10,7)
Другая	14,5 (± 17,5)
Профилирование
G1	9.7 (± 8.2)
G2	16,2 (± 12,7)
G3	37,4 (± 22,1)
Лимфатическая инвазия
L 0	18.2 (± 17.3)
L 1	24,3 (± 18,9)
Сосудистое вторжение
V0	19,7 (± 17,9)
V1	27,8 (± 19,9)
Экстрогенорецепторы
положительный	16.8 (± 14.1)
отрицательный	16.8 (± 14.1)
Рецептора прогестерона
положительный	16,5 (± 13,8)
отрицательный	33,5 (± 24,1)
HER2 / Neu
положительный	27.5 (± 19,0)
отрицательный	18,7 (± 17,5)
Рецепторный статус
ER + PR +	16.1 (± 13.2)
ER + PR-	21,9 (± 19,1)
ER- PR +	40,6 (± 27,4)
ER- PR-	41,9 (± 23,8)

Отсутствие положительной динамики индекса онкомаркера в процессе проводимого лечения говорит о неблагоприятном течении и прогнозе болезни.

Ki67 служит индикатором прогноза остаточного риска у больных раком груди, получавших эндокринную терапию Летрозолом или Тамоксифеном. Использование эндокринной терапии напрямую коррелирует с уровнем Ki-67. Показатель онкомаркера после приема медикаментов рассматривается в качестве индекса резидуального (остаточного) заболевания после проведения лечения.

Динамика изменения индекса в ходе проведения химиотерапии помогает принять решение о ее целесообразности в конкретном случае. Снижение уровня Ki-67 происходит в любом случае проведения неоадъювантной химиотерапии. Отсутствие падения уровня онокомаркера является предвестником неблагоприятного прогноза заболевания.