Квм в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта

Описание

Помимо лактобактерий, в урогенитальном тракте здоровой женщины репродуктивного возраста может обнаруживаться более ста видов различных бактериальных микроорганизмов, грибов, вирусов и простейших. Возникновение нарушений количественно-качественных взаимоотношений резидентных микроорганизмов – сапрофитных и условно-патогенных, населяющих мочеполовую систему в норме, приводит к возникновению дисбаланса. Развитие дисбаланса микробиоценоза может сопровождаться метаболическими, иммунными нарушениями и в ряде случаев клиническими проявлениями, степень выраженности которых варьируется от бессимптомного носительства до выраженной клинической манифестации. В связи с вышеизложенным, такие нозологии как бактериальный вагиноз, урогенитальный кандидоз, заболевания, ассоциированные с микоплазмой, могут рассматриваться как частные случаи проявления дисбаланса микробиоценоза. Дисбиоз влагалища – это нарушение подвижного равновесия микрофлоры, сущность которого определяется характером качественных и количественных изменений в видовом составе микробных ассоциаций.
БАКТЕРИАЛЬНЫЙ ВАГИНОЗ (БВ) – это общий невоспалительный синдром, связанный с дисбиозом влагалищного биотопа, характеризующийся чрезмерно высокой концентрацией облигатно и факультативно анаэробных условнопатогенных микроорганизмов и резким снижением или отсутствием молочнокислых бактерий в отделяемом влагалища.
В настоящее время БВ не рассматривается как инфекционный процесс влагалища. Частота возникновения БВ варьирует от 30 до 60-80% в структуре воспалительных заболеваний половых органов.
Слово «бактериальный» объясняет повышенное содержание аэробных и анаэробных бактерий во влагалище (с преобладанием последних), а «вагиноз» – отсутствие лейкоцитов – клеток ответственных за воспаление.

В настоящее время для установления диагноза используют традиционные методы клинической и лабораторной диагностики.

Этиологически значимые инфекционные агенты выявляются с помощью методов лабораторного исследования: микроскопии нативных и окрашенных метиленовым синим и по Граму препаратов, культурального исследования (5% кровяной агар, среда Эндо, жидкие и твёрдые среды Сабуро), ПЦР-диагностики.

Стандартные методы лабораторной диагностики урогенитальных инфекций имеют ряд объективных ограничений; качество выполнения исследований во многом определяется профессиональной квалификацией врача клинической лабораторной диагностики.

Микроскопия мазков, окрашенных по Граму, позволяет определить:

1. количество и морфотинкториальные характеристики эпителиоцитов;
2. количество лейкоцитов, наличие фагоцитоза;
3. морфотипы микроорганизмов (10 морфотипов);
4. относительную количественную характеристику общего числа микроорганизмов в исследуемом препарате.

Объективные ограничения светооптической микроскопии позволяют идентифицировать только 10 морфотипов: Lactobacillus spp., Gardnerella vaginalis, Bacteroides spp., Mobiluncus spp., Fusobacterium spp., Leptotrihia spp., Veillonella spp., Candida spp., грамположительные кокки, колиформные палочки, при этом многие виды этиологически значимых облигатных и условно-патогенных возбудителей выявить невозможно. Кроме того, микроскопия даёт приблизительную количественную оценку биоценоза, что особенно существенно в определении этиологического значения выявленных условно-патогенных микроорганизмов в развитии воспалительного процесса у конкретной пациентки. Существенными недостатками также являются субъективизм и зависимость результата исследования от профессиональной квалификации врача клинической лабораторной диагностики.

Классическая микробиология до настоящего времени является «золотым стандартом» лабораторной диагностики, поскольку позволяет выполнить количественную характеристику, идентифицировать микроорганизм до вида и определить чувствительность выделенного штамма к лекарственным препаратам. Однако и этот метод не лишён ряда недостатков. Условно-патогенные микроорганизмы, главным образом, представлены анаэробными и факультативно-анаэробными микроорганизмами, для культивирования которых требуются высококачественные селективные питательные среды, специализированные лаборатории, оснащённые необходимым лабораторным оборудованием для выращивания анаэробов, специальная подготовка медицинского персонала лаборатории и высокий профессионализм исследователей. Неизбежно снижение эффективности метода в связи с объективными и субъективными погрешностями. Недостатком метода являются также длительные сроки культивирования (в среднем 7 дней) и необходимость сохранения жизнеспособности микроорганизмов до момента поступления биоматериала в лабораторию. Кроме того, ряд этиологически значимых микроорганизмов относятся к труднокультивируемым, что не позволяет основывать верификацию диагноза на результатах культурального исследования.

Метод ПЦР с детекцией результата по окончании реакции без количественного определения инфекционного возбудителя позволяет быстро и эффективно выявить искомый патогенный или условно-патогенный микроорганизм, минуя стадию культивирования и выделения чистых культур. Однако выявление условно-патогенных микроорганизмов без учёта количества конкретного микроорганизма и количественно-качественного состава исследуемого биотопа в целом, не позволяет определить этиологическое значение выявленных условно-патогенных микроорганизмов в развитии инфекционно-воспалительного процесса у конкретного пациента.

Решением проблемы количественной оценки широкого спектра условно-патогенных микроорганизмов является новый способ диагностики (патент на изобретение № 2362808 от 13.02.2008 г. «Способ диагностики дисбаланса микробиоты различных биотопов человека и степени его выраженности»), основанный на использовании метода ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (RT-PCR). С его помощью стало возможным количественное обнаружение клинически значимых трудно- и некультивируемых условно-патогенных микроорганизмов – грамположительных бактерий (Atopobium vaginae), облигатно-анаэробных грамотрицательных бактерий (Prevotella, Veilonella spp, Porphyromonas spp, Fusobacterium spp, Eubacterium spp, Sneathia, Leptotrichia, Megasphaera, Dialister, Lachnobacterium)‏.

В основу способа положена комплексная количественная оценка микробиоценоза урогенитального тракта путём сравнения содержания конкретных представителей нормо– и условно-патогенной биоты с общей бактериальной массой (ОБМ):

• сравнение количества лактобактерий с ОБМ даёт возможность оценить выраженность нарушений нормофлоры;
• соотношение количеств условных патогенов в ОБМ позволяет определять значимость тех или иных микроорганизмов в развитии дисбаланса и степень его выраженности;
• качество забора соскоба и адекватность результата исследования оценивается с помощью специального параметра – контроля взятия материала (КВМ). КВМ представляет собой количество геномной ДНК человека в биоматериале, источником которой являются эпителиальные клетки, попадающие в пробу при правильной технике взятия биоматериала;
• результаты количественных исследований методом RT-PCR не только дают возможность врачу определять объём необходимого вмешательства, но и позволяют выбрать точную направленность терапии;
• впервые можно оценить эффективность лечения и то, насколько удалось восстановить нормальный баланс биоценоза. В ходе исследования за короткий промежуток времени из одной биопробы выполняется количественная оценка КВМ, ОБМ (степень обсемененности), нормофлоры, безусловных патогенов и условно-патогенных микроорганизмов.

Выявляемые показатели

Комплексная оценка состояния микробиоценоза влагалища:

• КВМ, ОБМ, микоплазмы (Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp.), дрожжеподобные грибы (Candida spp.) – абсолютные значения;
• нормофлора (Lactobacillus spp.), облигатно-анаэробные микроорганизмы Gardnerella vaginalis/ Prevotella spp. – относительные количества генетически родственных групп микроорганизмов в ОБМ;
• идентификация патогенов (Chlamidia trachomatis, Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Mycoplasma genitalium, CMV, HSV-1, HSV-2).

Под «spp.» подразумевается широкая группа микроорганизмов, значимая для диагностики дисбиоза, которая относится к данному роду, но может не соответствовать полностью роду в его систематическом понимании.

Материал для исследований. Для исследования женщин в репродуктивном возрасте используют соскобы эпителиальных клеток из влагалища (заднебоковые своды). Соскобы из уретры и цервикального канала могут быть исследованы по решению врача; в этих случаях трактовка результатов отличается.

Особенности взятия материала из влагалища:материал должен быть взят ДО проведения мануального исследования. Соскоб берут с верхнего бокового или верхнего заднего свода влагалища. У девочек взятие материала производят со слизистой оболочки преддверия влагалища, а в отдельных случаях – из заднего свода влагалища через гименальные кольца.

* КВМ – Контроль достаточности взятияматериала

Урогенитальный соскоб представляет собой разновидность биологического материала, используемого для лабораторной диагностики инфекционно-воспалительных процессов мочеполовых путей.

Соскоб слизистой урогенитального тракта

дает возможность, кроме того, оценить морфологию клеток эпителия. Выявить присутствие их патологических морфотипов, отклонения от нормальных значений абсолютного количества эпителиальных клеток, лейкоцитов и т.д.

Исследование урогенитального соскоба эпителия у женщин позволяет:

• оценить состояние нормобиоты влагалища
• установить наличие дисбиотических процессов,
• уточнить, какие условно-патогенные микроорганизмы преобладают в микробиологическом пейзаже мочеполовых путей
• и, благодаря этому, подобрать для лечения оптимальные эубиотики.

У мужчин микробиологический скрининг бактериальной массы, обитающей в урогенитальном тракте, также позволяет установить те или иные патологические сдвиги в заселяющих его бактерий.

Соскоб эпителиальных клеток урогенитального тракта исследуется с помощью таких методов, как световая микроскопия, культуральный посев и ПЦР-анализ.

Бактериоскопическое исследование на световом микроскопе проводится с использованием нативных или окрашенных (с метиленовым синим, по Граму) препаратов (соскоба, нанесенного на стерильное предметное стекло). С помощью этого метода в биоматериале можно обнаружить некоторые патогенные микробные агенты (гонококки, трихомонады). А также условно-патогенные микроорганизмы (гарднереллы, дрожжеподобные грибки, кокковые бактерии). Кроме того, микроскопия урогенитального соскоба позволяет обнаружить в поле зрения признаки воспалительных процессов в мочеполовых путях.

Это устанавливается на основании выявления повышенного уровня лейкоцитов, эпителиальных клеток и слизи, иногда эритроцитов (при кровотечениях).

Наряду с рядом достоинств микроскопического исследования, оно обладает определенными, довольно весомыми, недостатками. К ним относят необходимость высокой компетентности лаборанта, выполняющего исследование. Так как достоверность полученных при этом результатов будет во многом зависеть от правильности проведения методики, подготовки мазка и т.д. Кроме того, диагностические возможности световой микроскопии довольно ограничены. Поэтому с ее помощью можно обнаружить лишь незначительный перечень возбудителей урогенитальных инфекций и условно-патогенных микробов. И, использовать его как единственный метод диагностики, для окончательной и точной верификации диагноза абсолютно невозможно.

Культуральное исследование соскоба из мочеполовых путей обладает намного более широкими диагностическими возможностями. Оно позволяет идентифицировать большое количество микроорганизмов – как неспецифической микробной флоры (условно-патогенной), так и специфических возбудителей половых инфекций. В большинстве случаев это микробные агенты бактериального происхождения. Помимо точной идентификации возбудителя заболевания, бакпосев позволяет определять, к каким антимикробным препаратам он проявляется самую высокую чувствительность.

Бактериологический посев производится на особые питательные среды, различающиеся в зависимости от подозреваемой инфекции и используемого материала.

Биологический материал высевают в чашках Петри или пробирках на питательную среду, ставят на 5-7 суток в термостат, где поддерживается оптимальная для развития и роста возбудителя температура. По окончании этого периода материал достают и выросшие колонии микробов подвергают идентификации.

Наряду с массой достоинств метода существуют и его недостатки. Это, в первую очередь, необходимость долгого ожидания результатов. Во-вторых, метод отличается значительной трудоемкостью и относительно высокой стоимостью. Тем не менее, уже много лет культуральный посев является «золотым стандартом» в диагностике урогенитальных и многих других инфекций.

На сегодняшний день наиболее точным, чувствительным и специфичным является исследование урогенитального соскоба с помощью ПЦР. Это исследование предполагает создание множественных копий генома инфекционного возбудителя, что облегчает его узнавание в биоматериале тест-системой.

За счет высокой чувствительности ПЦР позволяет обнаруживать присутствие микробного патогена даже при его незначительном количестве в организме больного и в исследуемой пробе. Таким образом, эта методика практически всегда используется для верификации диагноза на половые инфекции. Еще одним немаловажным преимуществом метода перед остальными (в частности, перед культуральным исследованием) является быстрота его проведения. Как правило, результаты анализа готовы в течение одного рабочего дня.

ПЦР соскоба эпителия из мочеполовых путей позволяет выявлять такие микроорганизмы, как хламидии, уреа- и микоплазмы, гонококки, вирус генитального герпеса и вирус папилломы человека (а также устанавливать их видовую принадлежность), цитомегаловирус. В большинстве случаев эти возбудители инфекций не обнаруживаются в биоматериале с помощью других методов.

При исследовании урогенитального соскоба путем ПЦР определяется КВМ (контроль взятия материала) – имеется в виду его абсолютное значение. Кроме того, определяется объем бактериальной массы – тоже в абсолютном значении в рамках количественной характеристики.

Урогенитальный соскоб – исследование, которое помогает определить причину возникших патологий у мужчин и женщин.

Для анализа используется материал эпителиальных клеток слизистой половых органов.

В нем определяют соотношение нормальной и условно-патогенной микрофлоры, а также наличие патогенных микроорганизмов.

Для чего нужен анализ?

У мужчин, и у женщин, в норме, в урогенитальном тракте формируется устойчивая микросистема, состоящая из множества видов бактерий.

У женщин это в основном лактобактерии.

Помимо них, в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта, как правило, находят бифидобактерии, некоторые виды стрептококков, стафилококков, а иногда и кишечную палочку.

Нормальная микрофлора мужчин может содержать стафилококков, коринобактерии и особые виды микобактерий смегмы.

Правда, живут все эти бактерии только в самом начале тракта, в первых пяти сантиметрах уретры.

Задняя уретра и простата в норме должны быть стерильными.

В норме урогенитальный микроценоз существует в балансе.

Он сохраняет нужное количество полезных бактерий и не дает разрастаться условно-патогенным и патогенным микроорганизмам.

Его нарушение служит сигналом, по которому можно заподозрить развитие инфекционного заболевания.

Соскоб эпителиальных клеток урогенитального тракта проводят с несколькими целями:

• Для оценки состояния микрофлоры у мужчин и женщин.
• Для определения патогенных микроорганизмов, таких как бактерии, простейшие, вирусы и грибы, которые могут быть причиной развития многих заболеваний.
• Для выявления атипично измененных клеток эпителия, которые могут быть первым признаком возникновения предракового состояния.

Особенности процедуры урогенитального соскоба у женщин

Перед процедурой, для того, чтобы убрать излишки полового секрета, уретра и влагалище обрабатываются стерильным раствором.

Для забора материала используют специальные стерильные, одноразовые зонды.

Урогенитальный соскоб у женщин может браться:

• Из цервикального канала, места в котором шейка матки переходит непосредственно в саму матку. Для получения материала зонд вводят на глубину до 1,5 см и вращают несколько раз. Затем полученный мазок наносят на предметное стекло для микроскопии или же помещают в пробирку для исследования методом ПЦР.
• Из уретры материал получают примерно так же, зонд помещается на глубину до 1,5 см, предварительно прижав уретру со стороны влагалища к лобковой кости.
• Из влагалища соскоб для анализа получают с его задней стенки, просто проводя по поверхности слизистой зондом.

Помимо отдельных мазков, врач может взять на анализ и смешанный урогенитальный соскоб, например, из цервикального канала и шейки матки.

Обычно такой вид анализа используется для выявления атипичных клеток в диагностике предраковых изменений.

Особенности процедуры урогенитального соскоба у мужчин

Урогенитальный соскоб у мужчин берут из уретры.

Перед анализом область уретры обрабатывается смоченным в стерильном растворе тампоном.

При необходимости посторонние выделения, которые могут быть при некоторых инфекционных заболеваниях, также удаляют стерильным тампоном.

Зонд помещают не глубже 4 см и вращательными движениями получают соскоб с эпителия.

Для этого на конце зонда сделана специальная щеточка, которая собирает эпителиальные клетки слизистой со стенок канала.

Материал также помещают на предметное стекло, для исследования под микроскопом или же в пробирку для анализа методом ПЦР.

Соскоб урогенитального тракта относится к травматическим видам анализа.

Поэтому после его взятия, особенно у мужчин, могут быть неприятные ощущения при мочеиспускании, общий дискомфорт и обострение воспаления.

Иногда возможно выделение нескольких капель крови. Как правило, все негативные последствия проходят самостоятельно за один-два дня.